Source de l’image: ARIMAG/.com
Rappelez-vous la dernière fois où vos tubes ont montré des gouttelettes de condensation après incubation en température dans un thermobloc ou un thermomixeur? Finalement, vous avez même eu une perte de performance dans votre réaction enzymatique.
Qu’est-ce que la condensation?
La condensation est définie comme le passage de la phase gazeuse à la phase liquide. La condensation est le processus inverse de vaporisation. Le processus de condensation se produit lorsque la vapeur est saturée et entre en contact avec une surface froide (ou plus froide) par rapport à son origine.
Plus le delta de température entre le point le plus chaud et le point le plus froid dans un système fermé est élevé, plus vous obtiendrez de la condensation rapidement. Le microtube est un système parfaitement fermé.
De nombreuses réactions nécessitent des températures spécifiques supérieures à la température ambiante telles que 37 ° C, 42 ° C, 95 ° C, etc. En conséquence, une étape d’incubation de 30 min à 65 ° C par exemple se terminera par une couche de gouttelettes de condensat dans le couvercle de votre tube. Vous pensez peut-être qu’un tour dans la centrifugeuse et 100% de l’échantillon sont de retour au fond du microtube. Ce processus permet en effet de ramener les gouttelettes de condensation dans votre échantillon.
Mais il peut toujours y avoir un problème avec la réaction effectuée qui est effectuée lorsque vous démarrez votre étape de centrifugation. Les réactifs ont besoin de conditions constantes pour les processus moléculaires tels que la ligature, l’amplification, la traduction, la restriction ou toute réaction enzymatique à effectuer.
La réactivité d’une enzyme dépend de la température, de la disponibilité des partenaires de réaction mais aussi de la concentration en sel au sein de l’échantillon. En supposant un dosage enzymatique de 25 µL ayant une concentration en sel de 5% par exemple. Comme le processus de condensation est limité aux liquides, le condensat calculé de 3 µL dans le couvercle augmente la concentration en sel dans l’échantillon restant au fond du tube pendant l’étape de réaction enzymatique de près de 14%.
(Règle générale: 5% du volume de réaction de 25 µL: 1,25 µg de sel, 22 µL de liquide incl. le sel reste après condensation, c’est maintenant 5,682% du volume total; ce qui entraîne une concentration en sel 13,6% plus élevée)
Cette concentration en sel accrue n’arrêtera probablement pas votre réaction mais pourrait influencer l’efficacité de l’enzyme, ce qui se traduira par un rendement différent que possible dans des conditions optimisées. En bout de ligne, il vous manque des conditions constantes / reproductibles et efficaces.
Il existe un moyen simple et pratique d’éviter la condensation: faites en sorte que vos liquides d’échantillon soient le « point le plus froid » dans le tube de réaction. Bien sûr, la température de réaction est réglée à 70°C par exemple. Comment procéder ?
Une solution peut être un contre-chauffage par le haut du récipient par un couvercle chauffé.