Zdroj obrázku: ARIMAG/. com
Pamatujete si, kdy vaše zkumavky vykazovaly kondenzační kapky po inkubaci teploty v termobloku nebo termomixéru? Nakonec jste dokonce měli ztrátu výkonu ve své enzymatické reakci.
co je kondenzace?
kondenzace je definována jako změna z plynné fáze do kapalné fáze. Kondenzace je reverzní proces odpařování. Kondenzační proces nastává, když je pára nasycená a dostane se do kontaktu s chladným (nebo chladnějším) povrchem ve srovnání s jeho původem.
čím vyšší je teplotní delta mezi nejteplejším a nejchladnějším místem v uzavřeném systému, tím rychleji dojde ke kondenzaci. Mikrotrubička je dokonale uzavřený systém.
mnoho reakcí vyžaduje specifické teploty nad pokojovými teplotami, jako je 37°C, 42°C, 95°C atd. Výsledkem je, že inkubační krok 30 min při např. 65°C skončí vrstvou kapiček kondenzátu ve víku vaší zkumavky. Možná si myslíte, že jedno roztočení v odstředivce a 100% vzorku jsou zpět na dně mikrotrubičky. Tento proces skutečně pomáhá přivést zpět kondenzační kapičky do vzorku.
ale stále může být problém s provedenou reakcí, která se provádí při spuštění kroku centrifugace. Reagencie potřebují konstantní podmínky pro molekulární procesy, jako je ligace, amplifikace, translace, omezení nebo jakákoli enzymatická reakce.
reaktivita enzymu závisí na teplotě, dostupnosti reakčních partnerů, ale také na koncentraci soli ve vzorku. Za předpokladu 25 µL enzymatického testu, který má koncentraci soli např. 5 %. Protože proces kondenzace je omezen na kapaliny, vypočtený 3 µL kondenzátu uvnitř víka zvyšuje koncentraci soli ve zbývajícím vzorku na dně zkumavky během kroku enzymatické reakce téměř o 14 %.
(pravidlo: 5 % z 25 µL reakčního objemu: 1,25 µg soli, 22 µL kapaliny vč. sůl zůstává po kondenzaci, to je nyní 5,682 % z celkového objemu; což má za následek 13,6% vyšší koncentrace soli)
tato zvýšená koncentrace soli pravděpodobně nezastaví vaši reakci, ale může ovlivnit účinnost enzymu, což má za následek jiný výtěžek, než je možné za optimalizovaných podmínek. Sečteno a podtrženo, chybí vám konstantní / reprodukovatelné a efektivní podmínky.
existuje jednoduchý a pohodlný způsob, jak se vyhnout kondenzaci: Udržujte vzorky tekutin jako „nejchladnější místo“ v reakční zkumavce. Pro jistotu je reakční teplota nastavena na např. 70°C. jak postupovat?
jedním z řešení může být protiproud z horní části nádoby vyhřívaným víkem.