Kuvan lähde: ARIMAG /.com
Muistatko viimeksi, kun putkissasi näkyi tiivistymispisaroita termoblokissa tai termomikserissa tapahtuneen lämpötilan inkubaation jälkeen? Lopulta jopa entsymaattinen reaktiosi heikkeni.
mitä kondensaatio on?
kondensaatiolla tarkoitetaan kaasufaasista tapahtuvaa muutosta nestefaasiksi. Kondensaatio on käänteinen höyrystymisprosessi. Tiivistymisprosessi tapahtuu, kun höyry on kylläistä ja joutuu kosketuksiin kylmän (tai kylmemmän) pinnan kanssa verrattuna sen alkuperään.
mitä korkeampi lämpötila on suljetun järjestelmän lämpimimmän ja kylmimmän kohdan välillä, sitä nopeammin tiivistyminen tapahtuu. Mikrotube on täysin suljettu järjestelmä.
monissa reaktioissa tarvitaan spesifisiä lämpötiloja yli huonelämpötilojen, kuten 37°C, 42°C, 95°C jne. Tämän seurauksena 30 minuutin inkubaatiovaihe esim.65°C: ssa johtaa siihen, että putkilon kannessa on lauhdepisarakerros. Voi ajatella, että yksi spin sentrifugissa ja 100% näytteestä on taas mikrotuubin pohjalla. Tämä prosessi todellakin auttaa tuomaan tiivistymispisarat takaisin näytteeseesi.
mutta suoritetussa reaktiossa saattaa silti olla ongelmia, joka tapahtuu sentrifugointivaiheen alkaessa. Reagenssit tarvitsevat jatkuvia olosuhteita molekyyliprosesseille, kuten ligaatiolle, vahvistukselle, translaatiolle, rajoitukselle tai mille tahansa entsymaattiselle reaktiolle, joka on suoritettava.
entsyymin reaktiivisuus riippuu lämpötilasta, reaktiokumppaneiden saatavuudesta mutta myös näytteen suolapitoisuudesta. Oletetaan 25 µL: n entsymaattinen määritys, jonka suolapitoisuus on esim.5%. Koska kondensaatioprosessi rajoittuu nesteisiin, laskettu 3 µL: n kondensaatti kannen sisällä lisää suolapitoisuutta jäljellä olevan näytteen sisällä putken pohjassa entsymaattisen reaktiovaiheen aikana lähes 14 %.
(nyrkkisääntö: 5 % 25 µL: n reaktiotilavuudesta: 1,25 µg suolaa, 22 µL nestettä sis. suola säilyy kondensaation jälkeen, tämä on nyt 5,682 % kokonaistilavuudesta, mikä johtaa 13,6% korkeampaan suolapitoisuuteen)
tämä lisääntynyt suolapitoisuus ei todennäköisesti pysäytä reaktiotasi, mutta saattaa vaikuttaa entsyymin tehokkuuteen, mikä johtaa erilaiseen saantoon kuin optimoiduissa olosuhteissa on mahdollista. Tärkeintä on, sinulta puuttuu jatkuva / toistettavissa ja tehokas olosuhteet.
on olemassa yksinkertainen ja kätevä tapa välttää kondensaatio: pidä näytenesteet reaktioputken ”kylmimpänä kohtana”. Varmasti reaktiolämpötilaksi on asetettu esim. 70°C. miten edetään?
yksi ratkaisu voi olla vastakuumennus astian päältä lämmitetyn kannen avulla.