képforrás: ARIMAG /.com
emlékszel az utolsó alkalomra, amikor a csövek kondenzációs cseppeket mutattak a hőmérséklet inkubálása után egy thermoblockban vagy thermomixerben? Végül még az enzimatikus reakció teljesítményvesztése is volt.
mi a kondenzáció?
a kondenzáció a gázfázisból a folyadékfázisba történő változás. A kondenzáció a párolgás fordított folyamata. A kondenzációs folyamat akkor következik be, amikor a gőz telített és hideg (vagy hidegebb) felülettel érintkezik az eredetéhez képest.
minél magasabb a hőmérséklet-delta a zárt rendszer legmelegebb és leghidegebb pontja között, annál gyorsabban páralecsapódik. A mikrotube tökéletesen zárt rendszer.
sok reakcióhoz speciális hőmérsékletre van szükség a szobahőmérséklet felett, mint például 37, 42, 95, stb. Ennek eredményeként egy 30 perces inkubációs lépés pl. 65 6CC-nél kondenzátumcseppek rétegét eredményezi a cső fedelén belül. Gondolhatják, hogy egy centrifuga és a minta 100% – a visszakerül a mikrocső aljára. Ez a folyamat valóban segít visszahozni a kondenzációs cseppeket a mintába.
de még mindig lehet probléma az elvégzett reakcióval, amely a centrifugálási lépés megkezdésekor történik. A reagenseknek állandó körülményekre van szükségük a molekuláris folyamatokhoz, például ligáláshoz, amplifikációhoz, transzlációhoz, restrikcióhoz vagy bármilyen enzimatikus reakcióhoz.
egy enzim reaktivitása függ a hőmérséklettől, a reakciópartnerek elérhetőségétől, de a mintán belüli sókoncentrációtól is. Feltételezve, hogy a sókoncentráció pl. 5% – os, 25 MHz-es enzimatikus vizsgálatot kell végezni. Mivel a kondenzációs folyamat folyadékokra korlátozódik, a fedélen belüli számított 3 6L kondenzátum az enzimatikus reakció során közel 14% – kal növeli a só koncentrációját a cső alján maradt mintában.
( ökölszabály: 5% 25 6L reakciótérfogat: 1,25 ml só, 22 ml folyadék, beleértve. a só kondenzáció után marad, ez most a teljes térfogat 5,682 % – A; ami 13,6% – kal magasabb sókoncentrációt eredményez)
ez a megnövekedett sókoncentráció valószínűleg nem állítja le a reakciót, de befolyásolhatja az enzim hatékonyságát, ami az optimalizált körülmények között lehetségestől eltérő hozamot eredményez. A lényeg az, hogy hiányzik az állandó / reprodukálható és hatékony feltételek.
van egy egyszerű és kényelmes módszer a páralecsapódás elkerülésére: tartsa a mintafolyadékokat a reakciócső “leghidegebb pontjaként”. Az biztos, hogy a reakció hőmérséklete van beállítva, hogy pl. 70 6c. hogyan kell eljárni?
az egyik megoldás lehet az edény tetejéről egy fűtött fedéllel történő ellenfűtés.