Afbeeldingsbron: ARIMAG/. com
herinnert u zich de laatste keer dat uw buisjes condensatiedruppels vertoonden na incubatie van de temperatuur in een thermoblok of thermomixer? Uiteindelijk had je zelfs een prestatieverlies in je enzymatische reactie.
Wat is condensatie?
condensatie wordt gedefinieerd als de overgang van de gasfase naar de vloeibare fase. Condensatie is het omgekeerde proces van verdamping. Het condensatieproces vindt plaats wanneer de damp verzadigd is en in contact komt met een koud (of kouder) oppervlak in vergelijking met zijn oorsprong.
hoe hoger de temperatuurdelta tussen de warmste en de koudste plek in een gesloten systeem, hoe sneller u condensatie krijgt. De microtube is een perfect gesloten systeem.
veel reacties vereisen specifieke temperaturen boven kamertemperatuur zoals 37°C, 42°C, 95°C, enz. Hierdoor ontstaat bij een incubatiestap van 30 min bij bijvoorbeeld 65°C een laag condensaatdruppels in het deksel van de buis. Je zou kunnen denken, een draai in de centrifuge en 100% van het monster zijn terug op de bodem van de microtube. Dit proces helpt inderdaad om de condensatiedruppels terug te brengen naar uw monster.
maar er kan nog steeds een probleem zijn met de uitgevoerde reactie die wordt uitgevoerd wanneer u uw centrifugatiestap start. Reagentia hebben constante voorwaarden nodig voor moleculaire processen zoals afbinding, versterking, vertaling, beperking of wat voor enzymatische reactie dan ook moet worden uitgevoerd.
de reactiviteit van een enzym hangt af van de temperatuur, de beschikbaarheid van reactiepartners, maar ook van de zoutconcentratie in het monster. Uitgaande van een 25 µL enzymatische assay met een zoutconcentratie van bv. 5 %. Aangezien het condensatieproces beperkt is tot vloeistoffen, verhoogt het berekende condensaat van 3 µL in het deksel de zoutconcentratie in het resterende monster aan de onderkant van de buis tijdens de enzymatische reactiestap met bijna 14 %.
(vuistregel: 5% van 25 µL reactievolume: 1,25 µg zout, 22 µL vloeistof incl. het zout blijft na condensatie, dit is nu 5,682% van het totale volume; resulterend in 13,6% hogere zoutconcentratie)
deze verhoogde zoutconcentratie zal uw reactie waarschijnlijk niet stoppen, maar kan de efficiëntie van het enzym beïnvloeden, wat resulteert in een andere opbrengst dan mogelijk onder geoptimaliseerde omstandigheden. Bottom line is, je mist constante / reproduceerbare en efficiënte omstandigheden.
er is een eenvoudige en handige manier om condensatie te voorkomen: houd uw monstervloeistoffen de “koudste plek” in de reactiebuis. Zeker, de reactietemperatuur is ingesteld op bijvoorbeeld 70°C. Hoe verder te gaan?
een oplossing kan een tegenverwarming zijn vanaf de bovenkant van het vat door een verwarmd deksel.