bildekilde: ARIMAG /.com
Husk sist gang rørene dine viste kondensdråper etter temperaturinkubasjon i en termoblok eller thermomixer? Til slutt hadde du til og med et ytelsestap i din enzymatiske reaksjon.
hva er kondens?
Kondensasjon er definert som endringen fra gassfasen til væskefasen. Kondensering er den omvendte prosessen med fordampning. Kondensasjonsprosessen oppstår når dampen er mettet og kommer i kontakt med en kald (eller kaldere) overflate i forhold til opprinnelsen.
jo høyere temperaturdeltaet mellom det varmeste og det kaldeste stedet i et lukket system, desto raskere vil du få kondens. Microtube er et helt lukket system.
mange reaksjoner trenger spesifikke temperaturer over romtemperaturer som 37°C, 42°C, 95°C osv. Som et resultat vil et inkubasjonstrinn på 30 min ved f. eks. 65°c ende opp med et lag med kondensatdråper i lokket på røret. Du tror kanskje, ett spinn i sentrifugen og 100% av prøven er tilbake på bunnen av mikrorøret. Denne prosessen bidrar faktisk til å bringe kondensdråpene tilbake til prøven.
men det kan fortsatt være et problem med den utførte reaksjonen som gjøres når du starter sentrifugeringstrinnet. Reagenser trenger konstante forhold for molekylære prosesser som ligering, forsterkning, oversettelse, begrensning eller hva enzymatisk reaksjon må utføres.
reaktiviteten til et enzym avhenger av temperatur, tilgjengeligheten av reaksjonspartnere, men også av saltkonsentrasjonen i prøven. Forutsatt en 25 µ enzymatisk analyse som har en saltkonsentrasjon på f. eks. 5 %. Da kondenseringsprosessen er begrenset til væsker, øker det beregnede 3 µ kondensatet i lokket saltkonsentrasjonen i den gjenværende prøven på bunnen av røret under det enzymatiske reaksjonstrinnet med nesten 14 %.
(Tommelfingerregel: 5 % av 25 µ reaksjonsvolum: 1,25 µ salt, 22 µ væske inkl. saltet forblir etter kondensering, dette er nå 5,682% av det totale volumet; noe som resulterer i 13,6% høyere saltkonsentrasjon)
denne økte saltkonsentrasjonen vil sannsynligvis ikke stoppe reaksjonen din, men kan påvirke enzymets effektivitet, noe som resulterer i et annet utbytte enn mulig under optimaliserte forhold. Bunnlinjen er at du mangler konstante / reproduserbare og effektive forhold.
det er en enkel og praktisk måte å unngå kondens på: Hold prøvevæskene dine det «kaldeste stedet» i reaksjonsrøret. Reaksjonstemperaturen er helt sikkert satt til f. eks. 70°C. hvordan går man frem?
En løsning kan være en motoppvarming fra toppen av fartøyet med et oppvarmet lokk.