sursa imaginii: arimag /.com
vă amintiți ultima dată când tuburile dvs. au prezentat picături de condens după incubarea temperaturii într-un TERMOBLOC sau termomixer? În cele din urmă, ai avut chiar o pierdere de performanță în reacția enzimatică.
ce este condensarea?
condensarea este definită ca trecerea de la faza gazoasă la faza lichidă. Condensarea este procesul invers de vaporizare. Procesul de condensare are loc atunci când vaporii sunt saturați și intră în contact cu o suprafață rece (sau mai rece) în comparație cu originea sa.
cu cât este mai mare delta de temperatură între cel mai cald și cel mai rece loc dintr-un sistem închis, cu atât mai repede veți obține condens. Microtubul este un sistem perfect închis.
multe reacții au nevoie de temperaturi specifice peste temperaturile camerei, cum ar fi 37, 42, 95, 95, etc. Ca urmare, o etapă de incubare de 30 min, de exemplu, 65 centimetric C, se va încheia cu un strat de picături de condens în capacul tubului. S-ar putea să credeți că o rotire în centrifugă și 100% din eșantion sunt înapoi în partea de jos a microtubului. Acest proces ajută într-adevăr să readucă picăturile de condensare la proba dvs.
dar s-ar putea să existe încă o problemă cu reacția efectuată, care se face atunci când începeți etapa de centrifugare. Reactivii au nevoie de condiții constante pentru procesele moleculare precum ligarea, amplificarea, traducerea, restricția sau orice reacție enzimatică trebuie efectuată.
reactivitatea unei enzime depinde de temperatură, disponibilitatea partenerilor de reacție, dar și de concentrația de sare din probă. Presupunând un test enzimatic de 25 ecqicli care are o concentrație de sare de exemplu 5%. Deoarece procesul de condensare este limitat la lichide, condensul calculat de 3 centicli din capac crește concentrația de sare din proba rămasă din partea inferioară a tubului în timpul etapei de reacție enzimatică cu aproape 14 %.
(regula generală: 5% din volumul de reacție 25 oktl: 1,25 oktg sare, 22 oktl lichid incl. sarea rămâne după condensare, aceasta este acum 5,682% din volumul total; rezultând o concentrație de sare cu 13,6% mai mare)
această concentrație crescută de sare probabil nu vă va opri reacția, dar ar putea influența eficiența enzimei, rezultând un randament diferit decât este posibil în condiții optimizate. Linia de fund este, vă lipsesc condiții constante/ reproductibile și eficiente.
există o modalitate simplă și convenabilă de a evita condensarea: păstrați lichidele de probă fiind „cel mai rece punct” din tubul de reacție. Cu siguranță, temperatura de reacție este setată la, de exemplu, 70 centimetric C. Cum se procedează?
o soluție poate fi o contraîncălzire din partea superioară a vasului printr-un capac încălzit.