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¿Recuerda la última vez que sus tubos mostraron gotas de condensación después de la incubación de temperatura en un bloque térmico o termomezclador? Eventualmente, incluso tuviste una pérdida de rendimiento en tu reacción enzimática.
¿Qué es la condensación?
La condensación se define como el cambio de la fase gaseosa a la fase líquida. La condensación es el proceso inverso de vaporización. El proceso de condensación ocurre cuando el vapor está saturado y entra en contacto con una superficie fría (o más fría) en comparación con su origen.
Cuanto mayor sea el delta de temperatura entre el punto más cálido y el más frío dentro de un sistema cerrado, más rápido obtendrá condensación. El microtubo es un sistema perfectamente cerrado.
Muchas reacciones necesitan temperaturas específicas por encima de la temperatura ambiente, como 37 ° C, 42 ° C, 95°C, etc. Como resultado, un paso de incubación de 30 minutos a, por ejemplo, 65 ° C, terminará con una capa de gotas de condensado dentro de la tapa del tubo. Usted puede pensar, un giro en la centrífuga y el 100% de la muestra está de vuelta en la parte inferior del microtubo. De hecho, este proceso ayuda a devolver las gotas de condensación a la muestra.
Pero aún puede haber un problema con la reacción realizada que se realiza cuando inicia el paso de centrifugación. Los reactivos necesitan condiciones constantes para procesos moleculares como ligadura, amplificación, traslación, restricción o cualquier reacción enzimática que se deba realizar.
La reactividad de una enzima depende de la temperatura, la disponibilidad de compañeros de reacción, pero también de la concentración de sal dentro de la muestra. Suponiendo un ensayo enzimático de 25 µL con una concentración de sal, por ejemplo, del 5 %. Como el proceso de condensación se limita a líquidos, el condensado de 3 µL calculado dentro de la tapa aumenta la concentración de sal dentro de la muestra restante en el fondo del tubo durante el paso de reacción enzimática en casi un 14 %.
(Regla general: 5% de volumen de reacción de 25 µL: 1,25 µg de sal, 22 µL de líquido incl. la sal permanece después de la condensación, esto es ahora el 5,682% del volumen total; lo que resulta en una concentración de sal un 13,6% más alta)
Este aumento de la concentración de sal probablemente no detendrá su reacción, pero podría influir en la eficiencia de la enzima, lo que resulta en un rendimiento diferente del posible en condiciones optimizadas. En resumen, le faltan condiciones constantes / reproducibles y eficientes.
Hay una forma sencilla y cómoda de evitar la condensación: Mantener los líquidos de la muestra como el «punto más frío» en el tubo de reacción. Por supuesto, la temperatura de reacción se establece en, por ejemplo, 70°C. ¿Cómo proceder?
Una solución puede ser un contra-calentamiento desde la parte superior del recipiente mediante una tapa calentada.