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Ricordate l’ultima volta in cui i tubi hanno mostrato goccioline di condensa dopo l’incubazione della temperatura in un termoblocco o un bimby? Alla fine, hai anche avuto una perdita di prestazioni nella tua reazione enzimatica.
Che cos’è la condensazione?
La condensazione è definita come il passaggio dalla fase gassosa alla fase liquida. La condensazione è il processo inverso di vaporizzazione. Il processo di condensazione si verifica quando il vapore è saturo ed entra in contatto con una superficie fredda (o più fredda) rispetto alla sua origine.
Maggiore è il delta di temperatura tra il punto più caldo e il punto più freddo all’interno di un sistema chiuso, più velocemente si otterrà la condensa. Il microtubo è un sistema perfettamente chiuso.
Molte reazioni richiedono temperature specifiche al di sopra delle temperature ambiente come 37°C, 42 ° C, 95°C, ecc. Di conseguenza, una fase di incubazione di 30 min ad esempio a 65°C finirà con uno strato di goccioline di condensa all’interno del coperchio del tubo. Si potrebbe pensare, un giro nella centrifuga e il 100% del campione sono di nuovo nella parte inferiore del microtubo. Questo processo aiuta infatti a riportare le goccioline di condensa al campione.
Ma potrebbe esserci ancora un problema con la reazione eseguita che viene eseguita quando si avvia la fase di centrifugazione. I reagenti necessitano di condizioni costanti per processi molecolari come legatura, amplificazione, traduzione, restrizione o qualsiasi altra reazione enzimatica debba essere eseguita.
La reattività di un enzima dipende dalla temperatura, dalla disponibilità di partner di reazione ma anche dalla concentrazione di sale all’interno del campione. Assumendo un dosaggio enzimatico di 25 µL con una concentrazione salina del 5%. Poiché il processo di condensazione è limitato ai liquidi, il condensato calcolato di 3 µL all’interno del coperchio aumenta la concentrazione di sale all’interno del campione rimanente sul fondo del tubo durante la fase di reazione enzimatica di quasi il 14 %.
(Regola empirica: 5% di 25 µL volume di reazione: 1,25 µg di sale, 22 µL di liquido incl. il sale rimane dopo la condensazione, questo è ora 5.682 % del volume totale; così, il 13,6 % in più di concentrazione di sale)
Questo aumento della concentrazione di sale probabilmente non interrompere la vostra reazione, ma potrebbe influenzare l’efficienza dell’enzima, risultante in una diversa resa possibile in condizioni ottimizzate. La linea di fondo è che ti mancano condizioni costanti / riproducibili ed efficienti.
C’è un modo semplice e conveniente per evitare la condensa: mantenere i liquidi campione essendo il “punto più freddo” nel tubo di reazione. Di sicuro, la temperatura di reazione è impostata ad es. 70°C. Come procedere?
Una soluzione può essere un contro-riscaldamento dalla parte superiore della nave da un coperchio riscaldato.