Bildkälla: ARIMAG/. com
kom ihåg sista gången när dina rör visade kondensdroppar efter temperaturinkubation i en termoblock eller termomixer? Så småningom hade du till och med en prestandaförlust i din enzymatiska reaktion.
vad är kondens?
kondensation definieras som förändringen från gasfasen till vätskefasen. Kondensation är den omvända förångningsprocessen. Kondensationsprocessen sker när ångan är mättad och kommer i kontakt med en kall (eller kallare) yta jämfört med dess ursprung.
ju högre temperaturdelta mellan den varmaste och den kallaste platsen i ett slutet system, desto snabbare får du kondens. Microtube är ett perfekt slutet system.
många reaktioner behöver specifika temperaturer över rumstemperaturer som 37 C, 42 C, 95 C, etc. Som ett resultat kommer ett inkubationssteg på 30 min vid t.ex. 65 CCB sluta med ett lager av kondensatdroppar i locket på röret. Du kanske tror, en snurr i centrifugen och 100% av provet är tillbaka längst ner på mikroröret. Denna process hjälper verkligen till att få tillbaka kondensdropparna till ditt prov.
men det kan fortfarande vara ett problem med den utförda reaktionen som görs när du startar ditt centrifugeringssteg. Reagenser behöver konstanta betingelser för molekylära processer som ligering, amplifiering, översättning, begränsning eller vad enzymatisk reaktion behöver utföras.
reaktiviteten hos ett enzym beror på temperaturen, tillgängligheten av reaktionspartners men också på saltkoncentrationen i provet. Om man antar en enzymatisk analys på 25 oC som har en saltkoncentration på t.ex. 5%. Eftersom kondensationsprocessen är begränsad till vätskor, ökar det beräknade kondensatet på 3 kg i locket saltkoncentrationen i det återstående provet längst ner i röret under det enzymatiska reaktionssteget med nästan 14 %.
(tumregel: 5 % av 25 oC reaktionsvolym: 1,25 oc salt, 22 oc vätska inkl. saltet kvarstår efter kondensation, detta är nu 5.682 % av den totala volymen; vilket resulterar i 13.6% högre saltkoncentration)
denna ökade saltkoncentration kommer förmodligen inte att stoppa din reaktion men kan påverka enzymets effektivitet, vilket resulterar i ett annat utbyte än möjligt under optimerade förhållanden. Slutsatsen är att du saknar konstanta / reproducerbara och effektiva förhållanden.
det finns ett enkelt och bekvämt sätt att undvika kondens: Håll dina provvätskor den ”kallaste platsen” i reaktionsröret. För säker, reaktionstemperaturen är inställd på t. ex. 70 kcal C. Hur ska man gå vidare?
en lösning kan vara en motuppvärmning från toppen av kärlet med ett uppvärmt lock.