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lembre-se da última vez em que seus tubos mostraram gotículas de condensação após a incubação da temperatura em um termobloco ou termomixador? Eventualmente, você até teve uma perda de desempenho em sua reação enzimática.
o que é condensação?
a condensação é definida como a mudança da fase gasosa para a fase líquida. A condensação é o processo inverso de vaporização. O processo de condensação ocorre quando o vapor está saturado e entra em contato com uma superfície fria (ou mais fria) em comparação com sua origem.
quanto maior o delta de temperatura entre o ponto mais quente e o mais frio dentro de um sistema fechado, mais rápido você obterá condensação. O microtube é um sistema perfeitamente fechado.
muitas reações precisam de temperaturas específicas acima das temperaturas ambiente, como 37°C, 42°C, 95°C, etc. Como resultado, uma etapa de incubação de 30 min a, por exemplo, 65°C acabará com uma camada de gotículas de condensado dentro da tampa do seu tubo. Você pode pensar, uma rotação na centrífuga e 100% da amostra estão de volta na parte inferior do microtube. Este processo realmente ajuda a trazer de volta as gotículas de condensação para sua amostra.
mas ainda pode haver um problema com a reação executada que é feita quando você inicia sua etapa de centrifugação. Os reagentes precisam de condições constantes para processos moleculares como ligadura, amplificação, tradução, restrição ou qualquer reação enzimática que precise ser realizada.
a reatividade de uma enzima depende da temperatura, da disponibilidade de parceiros de reação, mas também da concentração de sal dentro da amostra. Assumindo um ensaio enzimático de 25 µL que tem uma concentração de sal de, por exemplo, 5 %. Como o processo de condensação é limitado a líquidos, o condensado calculado de 3 µL dentro da tampa aumenta a concentração de sal dentro da amostra restante na parte inferior do tubo durante a etapa de reação enzimática em quase 14 %.
(regra geral: 5% de 25 µL volume de reação: 1,25 µg de sal, 22 µL de líquido incl. o sal continua a ser depois de condensação, isto é, agora, 5.682 % do volume total; resultando em 13,6 % maior concentração de sal)
Este aumento da concentração de sal provavelmente não vai parar a sua reação, mas podem influenciar a eficiência da enzima, resultando em diferentes rendimento do que possível, sob condições otimizadas. Bottom line é, você está faltando constante / condições reprodutíveis e eficientes.
existe uma maneira simples e conveniente de evitar a condensação: Mantenha seus líquidos de amostra sendo o “ponto mais frio” no tubo de reação. Com certeza, a temperatura da reação é definida como, por exemplo, 70°C. Como proceder?
uma solução pode ser um contra-aquecimento a partir do topo do recipiente por uma tampa aquecida.