Laboratorio Latz

Una de las demostraciones más impresionantes de bioluminiscencia también es la más fácil. Los dinoflagelados, las fuentes más comunes de bioluminiscencia en la superficie del mar, se cultivan fácilmente en el laboratorio. Producen bioluminiscencia brillante tras la agitación. Las siguientes instrucciones describen cómo obtener cultivos de dinoflagelados y cultivarlos en el hogar, la escuela o el laboratorio. A continuación, consulte la página Web sobre demostraciones de bioluminiscencia. Así que buena suerte!

El libro Técnicas de Cultivo de Algas es una referencia exhaustiva sobre el cultivo de dinoflagelados y otros fitoplancton.

Cultivos

Aquí hay algunos lugares para obtener dinoflagelados luminiscentes. Tenga en cuenta que esta lista no es un endoso, solo una sugerencia:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Cultivos de dinoflagelado brillante Pyrocystis fusiformis y nutrientes.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  «Luces del mar». Cultivos de Pyrocystis fusiformis en diferentes tamaños.
• EMPCO
  Cultivos de dos especies de Piroquistes.
• Carolina Biological Supply
  Cultivos de Piroquistes.
• La Colección de cultivos de Algas de la Universidad de Texas
  Una colección de cultivos de algas utilizada por científicos.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (célula esférica grande, luminiscencia brillante)
  Pyrocystis lunula LB2166 (crecimiento rápido, luminiscencia brillante)
  Pyrocystis lunula LB2504 (crecimiento rápido, luminiscencia brillante)
• Centro Nacional de Algas Marinas y Microbiota
  Una gran colección de cultivos de dinoflagelados luminiscentes y otros fitoplancton, utilizados por científicos.

Nutrientes

Si puedes cultivar plantas de interior, puedes mantener dinoflagelados. Al igual que las plantas de interior necesitan fertilizante para ayudarles a crecer, los dinoflagelados también tienen necesidades nutricionales. Los dinoflagelados requieren nitrato, fosfato, metales traza y vitaminas. Estos nutrientes se preparan en condiciones estériles, por lo que si no tiene un autoclave disponible, es más fácil comprar medios ya preparados que hacer el suyo propio.

• Tanto Pyrofarms como EMPCO (ver más arriba) venden nutrientes listos para usar para el crecimiento de dinoflagelados.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Medio de agua de mar Alga-Gro «para el cultivo de algas marinas».
    Esta es una solución completa lista para usar. Simplemente agregue dinoflagelados.
  • Una guía para el cultivo de algas.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Mezcla de sal basal de enriquecimiento marino de Guillard (f/2) sin silicato
    «Con los macro y micronutrientes descritos por Guillard (1975).»
    Sigma # G1775, precio 1 14.80 (USD) por 10 L.
    Esta es una solución completa lista para usar. ¡Solo agrega dinoflagelados!
• Centro Nacional de Algas Marinas y Microbiota
  • Elija medios L1 o f / 2 para dinoflagelados.
  • Medios preparados (1 galón, listo para usar) o kits de medios (solo agregue agua de mar)
  • Para el que lo hace por sí mismo (solo para los valientes, recetas de cultivo que requieren un equilibrio sensible y autoclave para la esterilización.

Mantenimiento de cultivos

Todo lo que necesita son luces y un temporizador. Si utiliza medios estériles y cristalería, sus cultivos continuarán para siempre; cada mes vierta aproximadamente 1/4 de la cultura en algún medio nuevo. Si no puede mantener condiciones de cultivo estériles, las células podrían durar solo de unas pocas semanas a un mes antes de que las bacterias crezcan en exceso en el cultivo.

• Temperatura ambiente (20-25 degC)
• Iluminación con bombillas fluorescentes blancas frías o LED. Las luces de la tienda funcionan bien.
• Ciclo de luz (12 horas cada luz, oscuro). Demostrar bioluminiscencia al menos a las 2 horas del ciclo oscuro.
• Frascos de cultivo: Cristalería esterilizada si hay autoclave disponible, de lo contrario, utilice frascos desechables de cultivo de tejidos
• Medios de cultivo (véase más arriba)

Medición de la concentración celular

La cantidad de bioluminiscencia que se observa o mide depende del número de células presentes. La forma más sencilla de determinar la concentración celular es contar una submuestra de células utilizando un microscopio estereoscópico. Aquí hay un protocolo para contar Pyrocystis fusiformis:

• Revuelva suavemente el frasco unas cuantas veces para mezclar bien el contenido.
• Extraiga una muestra de 200 µL utilizando un pipetman P1000 o una pipeta equivalente que le permita medir un volumen conocido.
• Coloque la muestra en el portaobjetos del pozo.
• Cuente el número de células bajo microscopio estereoscópico.
• Ajuste el volumen para que haya 10-20 celdas en el volumen (es decir, que sean fáciles de contar).
• Tome de 5 a 6 muestras, colocando cada una en un pozo de un tobogán de depresión.
• Recuento de células bajo microscopio estereoscópico. Calcule el conteo promedio de celdas.
• Calcular # células / mL (promedio de # células / volumen utilizado * 1000 µL / mL)
• Por ejemplo, 20 células / 200 µL * 1000 µL / mL = 100 células / mL