Latz Laboratory

jedna z najbardziej imponujących demonstracji bioluminescencji jest również najłatwiejsza. Dinoflagellaty, najczęstsze źródła bioluminescencji na powierzchni morza, są łatwo uprawiane w laboratorium. Po pobudzeniu wytwarzają jasną bioluminescencję. Poniższe instrukcje opisują, jak uzyskać Kultury dinoflagellate i hodować je w domu, szkole lub laboratorium. Następnie sprawdź stronę internetową na temat demonstracji bioluminescencji. Więc powodzenia!

Książka techniki hodowli glonów jest obszernym odniesieniem do hodowli dinoflagellanów i innych fitoplanktonów.

oto kilka miejsc do uzyskania luminescencyjnych dinoflagellanów. Zauważ, że ta lista nie jest aprobatą, tylko sugestią:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Kultury jasnego dinoflagellate Pyrocystis fusiformis i składniki odżywcze.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  „światła z Morza”. Kultury Pyrocystis fusiformis w różnych rozmiarach.
• EMPCO
• Carolina Biological Supply
  Kultury Pyrocystis.
• kolekcja Kultury alg UTEX (University of Texas)
  kolekcja Kultury alg używana przez naukowców.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (duża kulista komórka, jasna luminescencja)
  Pyrocystis lunula lb2166 (szybki wzrost, jasna luminescencja)
  Pyrocystis lunula LB2504 (szybki wzrost, jasna luminescencja)
• Narodowe Centrum alg morskich i mikrobioty
  duża kolekcja kultur luminescencyjnych dinoflagellanów i innych fitoplanktonów, używany przez naukowców.

odżywki

jeśli możesz uprawiać rośliny doniczkowe, możesz utrzymać dinoflagellates. Tak jak rośliny doniczkowe potrzebują nawozu, aby pomóc im rosnąć, tak też dinoflagellates mają potrzeby żywieniowe. Dinoflagelany wymagają azotanów, fosforanów, metali śladowych i witamin. Te składniki odżywcze są przygotowywane w sterylnych warunkach, więc jeśli nie masz dostępnego autoklawu, łatwiej jest kupić już przygotowane media niż zrobić własne.

• zarówno Pyrofarms, jak i EMPCO (patrz wyżej) sprzedają gotowe do użycia składniki odżywcze do wzrostu dinoflagellatu.
• Carolina Biological Supply Co.
  • alga-Gro medium do wody morskiej „do hodowli alg morskich”.
    to kompletne gotowe rozwiązanie. Wystarczy dodać dinoflagellates.
  • przewodnik po hodowli glonów.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ’ s (f/2) Marine enrichment basal salt mixture without silicate
    „with the makro – and micronutrients as described by Guillard (1975).”
    Sigma # G1775, Cena $14.80 (USD) za 10 L.
    jest to kompletne gotowe rozwiązanie. Wystarczy dodać dinoflagellates!
• National Center for Marine Algae and Microbiota
  • Wybierz media L1 lub f/2 dla dinoflagellates.
  • przygotowane media (1 galon, gotowe do użycia) lub zestawy mediów (wystarczy dodać wodę morską)
  • dla zrób to sam (tylko dla odważnych, przepisy kulturowe, które wymagają wrażliwej równowagi i autoklawu do sterylizacji.

utrzymanie kultury

wszystko czego potrzebujesz to Światła i timer. Jeśli używasz sterylnych mediów i szkła, Twoje kultury będą trwać wiecznie; co miesiąc wlewaj około 1/4 kultury do jakiegoś nowego medium. Jeśli nie można utrzymać sterylnych warunków hodowli, komórki mogą trwać tylko kilka tygodni do miesiąca, zanim bakterie zarastają Kultury.

• temperatura pokojowa (20-25 degC)
• oświetlenie za pomocą chłodno-białych żarówek fluorescencyjnych lub LED. Oświetlenie Sklepu działa dobrze.
• cykl naświetlania (12 godzin na każde światło, ciemność). Wykazać bioluminescencję co najmniej 2 godziny w cyklu ciemnym.
• kolby do hodowli-sterylizowane szkło, jeśli dostępny jest autoklaw, w przeciwnym razie użyj jednorazowych kolb do hodowli tkanek
• pożywki do hodowli (patrz wyżej)

pomiar stężenia komórek

ilość obserwowanej lub mierzonej bioluminescencji zależy od liczby obecnych komórek. Najprostszym sposobem określenia stężenia komórek jest policzenie podpróbki komórek za pomocą mikroskopu stereoskopowego. Oto protokół liczenia Pyrocystis fusiformis:

• delikatnie obracać kolbę kilka razy, aby dokładnie wymieszać zawartość.
• Usuń 200 µL próbki za pomocą pipety P1000 lub równoważnej pipety, która pozwala zmierzyć znaną objętość.
• umieść próbkę w szkiełku studni.
• policz liczbę komórek pod mikroskopem stereoskopowym.
• Dostosuj głośność tak, aby w objętości było 10-20 komórek (tj.
• weź 5-6 próbek, umieszczając każdą W StuDni suwaka depresji.
• Policz # komórki pod mikroskopem stereoskopowym. Oblicz średnią liczbę komórek.
• Oblicz # komórki / mL (średnia # komórki / objętość użyta * 1000 µL / mL)
• na przykład 20 komórek / 200 µL * 1000 µL / mL = 100 komórek / mL