Laboratorul Latz

una dintre cele mai impresionante demonstrații ale bioluminescenței este, de asemenea, cea mai ușoară. Dinoflagelatele, cele mai frecvente surse de bioluminescență la suprafața mării, sunt ușor cultivate în laborator. Ele produc bioluminescență strălucitoare la agitație. Următoarele instrucțiuni descriu cum să obțineți culturi dinoflagelate și să le cultivați acasă, la școală sau la laborator. Apoi consultați pagina Web despre demonstrațiile de bioluminescență. Deci, noroc!

cartea tehnici de Cultură a algelor este o referință cuprinzătoare privind cultivarea dinoflagelatelor și a altor fitoplancton.

culturi

iată câteva locuri pentru a obține dinoflagelate luminescente. Rețineți că această listă nu este o aprobare, ci doar o sugestie:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  culturi de pyrocystis fusiformis luminos dinoflagelat și nutrienți.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  „lumini de la mare”. Culturi de pyrocystis fusiformis în diferite dimensiuni.
• EMPCO
  culturi de două specii de Pirocist.
• Carolina Biological Supply
  culturi de Pyrocystis.
• colecția de Cultură Utex (Universitatea din Texas) a algelor
  o colecție de cultură a algelor folosită de oamenii de știință.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (celulă sferică mare, luminiscență strălucitoare)
  pyrocystis lunula lb2166 (creștere rapidă, luminiscență strălucitoare)
  Pyrocystis lunula lb2504 (creștere rapidă, luminiscență strălucitoare)
• Centrul Național pentru alge Marine și microbiotă
  o colecție mare de culturi de dinoflagelate luminescente și alte fitoplanctoane, folosit de oamenii de știință.

nutrienți

dacă puteți cultiva plante de apartament, atunci puteți menține dinoflagelate. La fel cum plantele de apartament au nevoie de îngrășăminte pentru a le ajuta să crească, la fel și dinoflagelatele au nevoi nutriționale. Dinoflagelații necesită nitrați, fosfat, urme de metale și vitamine. Acești nutrienți sunt preparați în condiții sterile, deci dacă nu aveți la dispoziție o autoclavă, este mai ușor să cumpărați suporturi deja pregătite decât să vă faceți propriile.

• atât Pyrofarms, cât și EMPCO (vezi mai sus) vând substanțe nutritive gata de utilizare pentru creșterea dinoflagelatului.
• Carolina Biological Supply Co.
  • mediu de apă de mare Alga-Gro „pentru cultivarea algelor marine”.
    aceasta este o soluție completă gata de plecare. Doar adăugați dinoflagelate.
  • un ghid pentru cultivarea algelor.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • amestecul de sare bazală de îmbogățire Marină al lui Guillard (f/2) fără silicat
    „cu macro – și micronutrienți așa cum este descris de Guillard (1975).”
    Sigma # G1775, preț 14,80 USD (USD) pentru 10 L.
    aceasta este o soluție completă gata de plecare. Doar adăugați dinoflagelate!
• Centrul Național pentru alge Marine și Microbiota
  • alegeți mediile L1 sau f/2 pentru dinoflagelate.
  • preparate media (1 galon, gata de utilizare) sau kituri media (doar adăugați apă de mare)
  • pentru do-it-your-selfer (doar pentru cei curajoși, rețete de cultură care necesită un echilibru sensibil și autoclavă pentru sterilizare.

menținerea culturilor

tot ce ai nevoie sunt lumini și un cronometru. Dacă utilizați suporturi sterile și articole din sticlă, culturile dvs. vor continua pentru totdeauna; în fiecare lună turnați aproximativ 1/4 din cultură într-un mediu nou. Dacă nu puteți menține condiții sterile de cultură, celulele ar putea dura doar câteva săptămâni până la o lună înainte ca bacteriile să depășească cultura.

• temperatura camerei (20-25 degC)
• iluminare cu becuri fluorescente sau LED alb-rece. Luminile magazinului funcționează bine.
• ciclu de lumină (12 ore fiecare lumină, întuneric). Demonstrați bioluminescența cu cel puțin 2 ore în ciclul întunecat.
• flacoane de Cultură-sticlărie sterilizată dacă este disponibilă autoclavă, utilizați în caz contrar flacoane de cultură de țesut de unică folosință
• medii de Cultură (vezi mai sus)

măsurarea concentrației celulare

cantitatea de bioluminescență observată sau măsurată depinde de numărul de celule prezente. Cea mai simplă modalitate de a determina concentrația celulară este de a număra un subeșantion de celule folosind un microscop stereo. Iată un protocol pentru a număra Pyrocystis fusiformis:

• rotiți ușor Balonul de câteva ori pentru a amesteca bine conținutul.
• scoateți proba de 200 unkticl utilizând un pipetman P1000 sau o pipetă echivalentă care vă permite să măsurați un volum cunoscut.
• se pune proba în diapozitiv bine.
• numărați numărul de celule sub microscop stereo.
• reglați volumul astfel încât să existe 10-20 de celule în volum (adică sunt ușor de numărat).
• luați 5-6 probe, plasând fiecare într-un puț al unui diapozitiv de depresiune.
• numărați # celule sub microscop stereo. Calculați numărul mediu de celule.
• se calculează # celule / mL (numărul mediu de celule / volum utilizat * 1000 oktl/mL)
• de exemplu, 20 celule / 200 oktl * 1000 oktl / mL = 100 celule / mL