Latz Laboratory

Una delle dimostrazioni più impressionanti della bioluminescenza è anche la più semplice. I dinoflagellati, le fonti più comuni di bioluminescenza sulla superficie del mare, sono facilmente coltivati in laboratorio. Producono bioluminescenza brillante su agitazione. Le seguenti istruzioni descrivono come ottenere colture dinoflagellate e coltivarle a casa, a scuola o in laboratorio. Quindi controlla la pagina Web sulle dimostrazioni di bioluminescenza. Quindi buona fortuna!

Il libro Algal Culturing Techniques è un riferimento completo sulla coltivazione di dinoflagellati e altri fitoplancton.

Culture

Ecco alcuni luoghi per ottenere dinoflagellati luminescenti. Si noti che questa lista non è un’approvazione, solo un suggerimento:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Colture del brillante dinoflagellato Pyrocystis fusiformis e sostanze nutritive.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  “Luci dal mare”. Colture di Pyrocystis fusiformis in diverse dimensioni.
• EMPCO
  Colture di due specie di Pyrocystis.
• Carolina Alimentazione biologica
  Colture di Pyrocystis.
• La collezione di colture di alghe UTEX (Università del Texas)
  Una collezione di colture algali utilizzata dagli scienziati.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (grande cella sferica, luminescenza luminosa)
  Pyrocystis lunula LB2166 (rapida crescita, luminescenza luminosa)
  Pyrocystis lunula LB2504 (rapida crescita, luminescenza luminosa)
• Centro nazionale per alghe marine e microbiota
  Una grande collezione di cultura di dinoflagellati luminescenti e altri fitoplancton, usato dagli scienziati.

Nutrienti

Se riesci a coltivare piante d’appartamento, puoi mantenere i dinoflagellati. Proprio come le piante d’appartamento hanno bisogno di fertilizzanti per aiutarli a crescere, così anche i dinoflagellati hanno esigenze nutrizionali. I dinoflagellati richiedono nitrati, fosfati, tracce di metalli e vitamine. Questi nutrienti sono preparati in condizioni sterili, quindi se non si dispone di un’autoclave disponibile, è più facile acquistare supporti già preparati che crearne uno proprio.

• Sia Pyrofarms che EMPCO (vedi sopra) vendono nutrienti pronti all’uso per la crescita dinoflagellata.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Mezzo di acqua di mare Alga-Gro “per la coltura di alghe marine”.
    Questa è una soluzione completa pronta all’uso. Basta aggiungere dinoflagellati.
  • Una guida alla coltura delle alghe.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard’s (f/2) marine enrichment basal salt mixture without silicate
    “With the macro – and micronutrients as described by Guillard (1975).”
    Sigma # G1775, prezzo $14.80 (USD) per 10 L.
    Questa è una soluzione completa pronta all’uso. Basta aggiungere dinoflagellati!
• Centro Nazionale per alghe marine e microbiota
  • Scegli i supporti L1 o f/2 per i dinoflagellati.
  • Supporti preparati (1 gallone, pronto all’uso) o kit multimediali(basta aggiungere acqua di mare)
  • Per il fai-da-te (solo per i coraggiosi, ricette di cultura che richiedono un equilibrio sensibile e un’autoclave per la sterilizzazione.

Mantenere culture

Tutto ciò che serve sono luci e un timer. Se si utilizzano supporti sterili e vetreria, le vostre culture continueranno per sempre; ogni mese versare circa 1/4 della cultura in qualche nuovo mezzo. Se non è possibile mantenere condizioni di coltura sterili, le cellule potrebbero durare solo da poche settimane a un mese prima che i batteri invadano la coltura.

• Temperatura ambiente (20-25 degC)
• Illuminazione con lampadine fluorescenti o LED bianco freddo. Negozio luci funzionano bene.
• Ciclo di luce (12 ore ogni luce, scuro). Dimostrare la bioluminescenza almeno 2 ore nel ciclo scuro.
• Boccette di coltura-Vetreria sterilizzata se è disponibile l’autoclave, altrimenti utilizzare boccette di coltura di tessuti monouso
• Mezzi di coltura (vedi sopra)

Misurazione della concentrazione cellulare

La quantità di bioluminescenza osservata o misurata dipende dal numero di cellule presenti. Il modo più semplice per determinare la concentrazione cellulare è contare un sottocampione di cellule utilizzando uno stereomicroscopio. Ecco un protocollo per contare Pyrocystis fusiformis:

• Delicatamente swirl flask un paio di volte per mescolare accuratamente il contenuto.
• Rimuovere 200 µL di campione utilizzando un pipetman P1000 o una pipetta equivalente che consente di misurare un volume noto.
• Posizionare il campione nel pozzetto.
• Contare il numero di cellule sotto stereo microscopio.
• Regola il volume in modo che ci siano 10-20 celle nel volume (cioè, sono facili da contare).
• Prelevare 5-6 campioni, collocandoli ciascuno in un pozzetto di un vetrino a depressione.
• Numero di celle al microscopio stereo. Calcola il numero medio di celle.
• Calcola # celle/mL (#celle / volume medio utilizzato * 1000 µL/mL)
• Ad esempio, 20 celle / 200 µL * 1000 µL / mL = 100 celle / mL