Laboratoire Latz

L’une des démonstrations les plus impressionnantes de bioluminescence est également la plus facile. Les dinoflagellés, les sources de bioluminescence les plus courantes à la surface de la mer, sont facilement cultivés en laboratoire. Ils produisent une bioluminescence brillante lors de l’agitation. Les instructions suivantes décrivent comment obtenir des cultures de dinoflagellés et les cultiver à la maison, à l’école ou en laboratoire. Consultez ensuite la page Web sur les démonstrations de bioluminescence. Alors bonne chance!

Le livre Algal Culturing Techniques est une référence complète sur la culture des dinoflagellés et autres phytoplanctons.

Cultures

Voici quelques endroits pour obtenir des dinoflagellés luminescents. Notez que cette liste n’est pas une approbation, juste une suggestion:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Cultures du dinoflagellé brillant Pyrocystis fusiformis et nutriments.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  « Lumières de la mer ». Cultures de Pyrocystis fusiformis de différentes tailles.
• EMPCO
  Cultures de deux espèces de Pyrocystis.
• Carolina Biological Supply
  Cultures de Pyrocystis.
• La Collection de culture d’algues UTEX (Université du Texas)
  Une collection de culture d’algues utilisée par les scientifiques.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (grande cellule sphérique, luminescence brillante)
  Pyrocystis lunula LB2166 (croissance rapide, luminescence brillante)
  Pyrocystis lunula LB2504 (croissance rapide, luminescence brillante)
• Centre National des Algues marines et du Microbiote
  Une grande collection de culture de dinoflagellés luminescents et d’autres phytoplanctons, utilisé par les scientifiques.

Nutriments

Si vous pouvez cultiver des plantes d’intérieur, vous pouvez maintenir les dinoflagellés. Tout comme vos plantes d’intérieur ont besoin d’engrais pour les aider à pousser, les dinoflagellés ont également des besoins nutritionnels. Les dinoflagellés nécessitent du nitrate, du phosphate, des métaux traces et des vitamines. Ces nutriments sont préparés dans des conditions stériles, donc si vous n’avez pas d’autoclave disponible, il est plus facile d’acheter des supports déjà préparés que de fabriquer les vôtres.

• Pyrofarms et EMPCO (voir ci-dessus) vendent tous deux des nutriments prêts à l’emploi pour la croissance des dinoflagellés.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Milieu d’eau de mer Alga-Gro « pour la culture d’algues marines ».
    Il s’agit d’une solution complète prête à l’emploi. Ajoutez simplement des dinoflagellés.
  • Un guide de culture des algues.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Mélange de sel basal d’enrichissement marin de Guillard (f/2) sans silicate
     » Avec les macro et micronutriments tels que décrits par Guillard (1975). »
    Sigma # G1775, prix 14,80USD (USD) pour 10 L.
    Il s’agit d’une solution complète prête à l’emploi. Ajoutez simplement des dinoflagellés!
• Centre National des Algues Marines et du Microbiote
  • Choisissez des milieux L1 ou f/2 pour les dinoflagellés.
  • Supports préparés (1 gallon, prêts à l’emploi) ou kits de supports (il suffit d’ajouter de l’eau de mer)
  • Pour le do-it-your-selfer (pour les plus courageux seulement, recettes de culture nécessitant un équilibre sensible et autoclave pour la stérilisation.

Entretien des cultures

Tout ce dont vous avez besoin, ce sont des lumières et une minuterie. Si vous utilisez des milieux stériles et de la verrerie, vos cultures continueront à jamais; chaque mois, versez environ 1/4 de la culture dans un nouveau milieu. Si vous ne pouvez pas maintenir des conditions de culture stériles, les cellules pourraient ne durer que quelques semaines à un mois avant que les bactéries ne envahissent la culture.

• Température ambiante (20-25 degC)
• Éclairage avec des ampoules fluorescentes ou LED blanc froid. Les lumières de magasin fonctionnent bien.
• Cycle de lumière (12 heures par lumière, obscurité). Démontrer la bioluminescence au moins 2 heures dans le cycle sombre.
• Flacons de culture — Verrerie stérilisée si un autoclave est disponible, utilisez sinon des flacons de culture de tissus jetables
• Milieu de culture (voir ci-dessus)

Mesure de la concentration cellulaire

La quantité de bioluminescence observée ou mesurée dépend du nombre de cellules présentes. Le moyen le plus simple de déterminer la concentration cellulaire consiste à compter un sous-échantillon de cellules à l’aide d’un stéréomicroscope. Voici un protocole pour compter Pyrocystis fusiformis:

• Agiter doucement le flacon plusieurs fois pour bien mélanger le contenu.
• Prélevez un échantillon de 200 µL à l’aide d’un pipetman P1000 ou d’une pipette équivalente qui vous permet de mesurer un volume connu.
• Placer l’échantillon dans la lame du puits.
• Compter le nombre de cellules sous stéréomicroscopie.
• Réglez le volume de sorte qu’il y ait 10 à 20 cellules dans le volume (c’est-à-dire qu’elles sont faciles à compter).
• Prélevez 5 à 6 échantillons, en les plaçant chacun dans un puits d’une lame de dépression.
• Nombre de cellules sous stéréomicroscopie. Calculez le nombre moyen de cellules.
• Calculer le nombre de cellules / mL (nombre moyen de cellules / volume utilisé * 1000 µL / mL)
• Par exemple, 20 cellules / 200 µL * 1000 µL/mL = 100 cellules/mL