Latz Laboratory

Eine der beeindruckendsten Demonstrationen der Biolumineszenz ist auch die einfachste. Dinoflagellaten, die häufigsten Quellen für Biolumineszenz an der Meeresoberfläche, lassen sich leicht im Labor züchten. Sie erzeugen helle Biolumineszenz bei Bewegung. In den folgenden Anweisungen wird beschrieben, wie Dinoflagellatkulturen erhalten und zu Hause, in der Schule oder im Labor gezüchtet werden. Dann schauen Sie sich die Webseite zu Biolumineszenz-Demonstrationen an. Also viel Glück!

Das Buch Algal Culturing Techniques ist ein umfassendes Nachschlagewerk zur Kultivierung von Dinoflagellaten und anderem Phytoplankton.

Hier sind einige Orte, um lumineszierende Dinoflagellaten zu erhalten. Beachten Sie, dass diese Liste keine Billigung ist, nur ein Vorschlag:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Kulturen des hellen Dinoflagellaten Pyrocystis fusiformis und Nährstoffe.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  „Lichter vom Meer“. Kulturen von Pyrocystis fusiformis in verschiedenen Größen.
• EMPCO
  Kulturen von zwei Arten von Pyrocystis.
• Carolina Biologische Versorgung
  Kulturen von Pyrocystis.
• Die UTEX (University of Texas) Kultursammlung von Algen
  Eine Algenkultursammlung, die von Wissenschaftlern verwendet wird.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (große kugelförmige Zelle, helle Lumineszenz)
  Pyrocystis lunula LB2166 (schnelles Wachstum, helle Lumineszenz)
  Pyrocystis lunula LB2504 (schnelles Wachstum, helle Lumineszenz)
• Nationales Zentrum für Meeresalgen und Mikrobiota
  Eine große Kultursammlung von lumineszierenden Dinoflagellaten und anderem Phytoplankton, von Wissenschaftlern verwendet.

Nährstoffe

Wenn Sie Zimmerpflanzen anbauen können, können Sie Dinoflagellaten pflegen. So wie Ihre Zimmerpflanzen Dünger brauchen, um ihnen beim Wachsen zu helfen, haben auch Dinoflagellaten einen Nährstoffbedarf. Dinoflagellaten benötigen Nitrat, Phosphat, Spurenmetalle und Vitamine. Wenn Sie also keinen Autoklaven zur Verfügung haben, ist es einfacher, bereits vorbereitete Medien zu kaufen, als Ihre eigenen herzustellen.

• Sowohl Pyrofarms als auch EMPCO (siehe oben) verkaufen gebrauchsfertige Nährstoffe für das Dinoflagellatenwachstum.
• Carolina Biologische Versorgung Co.
  • Alga-Gro Meerwassermedium „zur Kultivierung von Meeresalgen“.
    Dies ist eine komplette Ready-to-go-Lösung. Fügen Sie einfach Dinoflagellaten hinzu.
  • Ein Leitfaden zur Kultivierung von Algen.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard’s (f/2) marine enrichment basal salt mixture without silicate
    „Mit den von Guillard (1975)beschriebenen Makro- und Mikronährstoffen.“
    Sigma #G1775, Preis $14.80 (USD) für 10 L.
    Dies ist eine komplette Ready-to-Go-Lösung. Fügen Sie einfach Dinoflagellaten hinzu!
• Nationales Zentrum für Meeresalgen und Mikrobiota
  • Wählen Sie L1- oder f / 2-Medien für Dinoflagellaten.
  • Vorbereitete Medien (1 Gallone, gebrauchsfertig) oder Medienkits (einfach Meerwasser hinzufügen)
  • Für den Heimwerker (nur für Mutige, Kulturrezepte, die ein empfindliches Gleichgewicht und einen Autoklaven zur Sterilisation erfordern.

Pflegen Kulturen

Alles, was Sie brauchen, sind Lichter und ein Timer. Wenn Sie sterile Medien und Glaswaren verwenden, werden Ihre Kulturen für immer weitergehen; Gießen Sie jeden Monat etwa 1/4 der Kultur in ein neues Medium. Wenn Sie keine sterilen Kulturbedingungen aufrechterhalten können, können die Zellen nur wenige Wochen bis zu einem Monat halten, bevor Bakterien die Kultur überwachsen.

• Zimmer temperatur (20-25 degC)
• Beleuchtung mit kühlen-weiß leuchtstofflampen oder led-lampen. Shop Lichter funktionieren gut.
• Licht zyklus (12 hr jeder licht, dark). Demonstrieren Sie Biolumineszenz mindestens 2 Stunden in den dunklen Zyklus.
• Kulturflaschen – Sterilisierte Glaswaren, wenn Autoklav verfügbar ist, ansonsten Einweg-Gewebekulturflaschen verwenden
• Kulturmedien (siehe oben)

Messzellkonzentration

Die Menge an Biolumineszenz, die beobachtet oder gemessen wird, hängt von der Anzahl der vorhandenen Zellen ab. Der einfachste Weg, die Zellkonzentration zu bestimmen, besteht darin, eine Teilprobe von Zellen mit einem Stereomikroskop zu zählen. Hier ist ein Protokoll zur Zählung von Pyrocystis fusiformis:

• Den Kolben einige Male vorsichtig schwenken, um den Inhalt gründlich zu mischen.
• Entnehmen Sie 200 µl Probe mit einem P1000 Pipetman oder einer gleichwertigen Pipette, mit der Sie ein bekanntes Volumen messen können.
• Probe in Objektträger geben.
• Anzahl der Zellen unter dem Stereomikroskop zählen.
• Stellen Sie die Lautstärke so ein, dass sich 10-20 Zellen im Volumen befinden (d. h. Sie sind leicht zu zählen).
• Nehmen Sie 5-6 Proben und legen Sie sie jeweils in eine Vertiefung eines vertieften Objektträgers.
• Zähle # Zellen unter dem Stereomikroskop. Berechnen Sie die durchschnittliche Zellzahl.
• Berechnen Sie # Zellen / ml (durchschnittliche # Zellen / verwendetes Volumen * 1000 µL/ml)
• Zum Beispiel 20 Zellen / 200 µL * 1000 µL/mL = 100 Zellen/ml