Lattlaboratorium

en af de mest imponerende demonstrationer af bioluminescens er også den nemmeste. Dinoflagellater, de mest almindelige kilder til bioluminescens ved havoverfladen, dyrkes let i laboratoriet. De producerer lyse bioluminescens ved agitation. Følgende instruktioner beskriver, hvordan man får dinoflagellatkulturer og dyrker dem derhjemme, i skolen eller i laboratoriet. Så tjek hjemmesiden på bioluminescens demonstrationer. Så held og lykke!

bogen Algedyrkningsteknikker er en omfattende reference til dyrkning af dinoflagellater og andet fytoplankton.

kulturer

her er nogle steder at få selvlysende dinoflagellater. Bemærk, at denne liste ikke er en godkendelse, bare et forslag:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  kulturer af det lyse Dinoflagellat Pyrocystis fusiformis og næringsstoffer.
• Sunnyside havbrug (805-964-5844)
  “lys fra havet”. Kulturer af Pyrocystis fusiformis i forskellige størrelser.
• EMPCO
  kulturer af to arter af Pyrocystis.
• Carolina biologisk forsyning
  kulturer af Pyrocystis.
• Kultursamling af alger
  en algekultursamling brugt af forskere.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (stor sfærisk celle, lys luminescens)
  Pyrocystis lunula LB2166 (hurtig vækst, lys luminescens)
  Pyrocystis lunula LB2504 (hurtig vækst, lys luminescens)
• National Center for Marine alger og mikrobiota
  en stor kultursamling af selvlysende dinoflagellater og andet fytoplankton, brugt af forskere.

næringsstoffer

hvis du kan dyrke stueplanter, kan du vedligeholde dinoflagellater. Ligesom dine stueplanter har brug for gødning for at hjælpe dem med at vokse, har dinoflagellater også ernæringsmæssige behov. Dinoflagellater kræver nitrat, fosfat, spormetaller og vitaminer. Disse næringsstoffer tilberedes under sterile forhold, så hvis du ikke har en autoklave tilgængelig, er det lettere at købe allerede forberedte medier end at lave dine egne.

• både Pyrofarms og EMPCO (se ovenfor) sælger brugsklare næringsstoffer til dinoflagellatvækst.
• Carolina Biologisk Forsyning Co.
  • Alga-Gro havvand medium “til dyrkning af marine alger”.
    dette er en komplet klar-til-gå løsning. Bare tilføj dinoflagellater.
  • en guide til dyrkning af alger.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ‘ s (f/2) marine berigelse basal saltblanding uden silikat
    “med makro – og mikronæringsstoffer som beskrevet af Guillard (1975).”
    Sigma #G1775, pris $14.80 (USD) for 10 L.
    dette er en komplet klar-til-gå-løsning. Bare tilføj dinoflagellates!
• National Center for Marine alger og mikrobiota
  • Vælg L1 eller f/2 medier til dinoflagellater.
  • forberedte medier (1 gallon, klar til brug) eller mediesæt (bare tilføj havvand)
  • til gør-det-din-selfer (kun for de modige, kulturopskrifter, der kræver en følsom balance og autoklave til sterilisering.

vedligeholdelse af kulturer

alt hvad du behøver er lys og en timer. Hvis du bruger sterile medier og glasvarer, vil dine kulturer fortsætte for evigt; hver måned hæld omkring 1/4 af kulturen i et nyt medium. Hvis du ikke kan opretholde sterile dyrkningsbetingelser, kan cellerne vare kun et par uger til en måned, før bakterier overgrover kulturen.

• stuetemperatur (20-25 degC)
• belysning med koldhvide fluorescerende eller LED-pærer. Shop lys fungerer godt.
• lyscyklus (12 timer hver lys, mørk). Demonstrere bioluminescens mindst 2 timer i den mørke cyklus.
• Kulturkolber-steriliseret glasvarer hvis autoklave er tilgængelig, skal du ellers bruge engangsvævskulturkolber
• kulturmedier (se ovenfor)

måling af Cellekoncentration

mængden af bioluminescens, der observeres eller måles, afhænger af antallet af tilstedeværende celler. Den enkleste måde at bestemme cellekoncentration på er at tælle en delprøve af celler ved hjælp af et stereomikroskop. Her er en protokol til at tælle Pyrocystis fusiformis:

• drej forsigtigt kolben et par gange for at blande indholdet grundigt.
• Fjern 200 liter-prøve ved hjælp af en P1000 pipetman eller tilsvarende pipette, der giver dig mulighed for at måle et kendt volumen.
• Placer prøve i godt dias.
• Tæl antallet af celler under stereomikroskop.
• Juster lydstyrken, så der er 10-20 celler i lydstyrken (dvs.de er lette at tælle).
• tag 5-6 prøver, placere hver i en brønd af en depression dias.
• Tæl # celler under stereomikroskop. Beregn gennemsnitligt celletal.
• Beregn # celler / mL (gennemsnit # celler / volumen brugt * 1000 liter / mL)
• for eksempel 20 celler / 200 liter * 1000 liter / mL = 100 celler/mL