Latz laboratoř

jedna z nejpůsobivějších demonstrací bioluminiscence je také nejjednodušší. Dinoflageláty, nejčastější zdroje bioluminiscence na hladině moře, se v laboratoři snadno pěstují. Po rozrušení produkují jasnou bioluminiscenci. Následující pokyny popisují, jak získat dinoflagelátové kultury a pěstovat je doma, ve škole nebo v laboratoři. Pak se podívejte na webovou stránku o demonstracích bioluminiscence. Tak hodně štěstí!

kniha techniky kultivace řas je komplexním odkazem na kultivaci dinoflagelátů a jiného fytoplanktonu.

kultury

zde jsou některá místa pro získání luminiscenčních dinoflagelátů. Všimněte si, že tento seznam není potvrzení, jen návrh:

• Pyrofarmy (760-335-0990)
  kultury jasného dinoflagelátu Pyrocystis fusiformis a živin.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  „světla z moře“. Kultury Pyrocystis fusiformis v různých velikostech.
• EMPCO
  kultury dvou druhů Pyrocystis.
• Carolina Biological Supply
  kultury Pyrocystis.
• UTEX (University of Texas) kulturní sbírka řas
  sbírka řas používaných vědci.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (velká sférická buňka, jasná luminiscence)
  Pyrocystis lunula LB2166 (rychlý růst, jasná luminiscence)
  Pyrocystis lunula LB2504 (rychlý růst, jasná luminiscence)
• Národní centrum pro mořské řasy a Mikrobiotu
  velká kulturní sbírka luminiscenčních dinoflagelátů a jiného fytoplanktonu, kterou používají vědci.

živiny

pokud můžete pěstovat Pokojové rostliny, můžete udržovat dinoflageláty. Stejně jako vaše pokojové rostliny potřebují hnojivo, které jim pomůže růst, tak i dinoflageláty mají nutriční potřeby. Dinoflageláty vyžadují dusičnany, fosfáty, stopové kovy a vitamíny. Tyto živiny se připravují za sterilních podmínek,takže pokud nemáte k dispozici autokláv, je snazší koupit již připravené médium, než si vyrobit vlastní.

• jak Pyrofarmy, tak EMPCO (viz výše) prodávají živiny připravené k použití pro růst dinoflagelátu.
• Carolina Biological Supply Co.
  • médium mořské vody Alga-Gro „pro kultivaci mořských řas“.
    Jedná se o kompletní ready-to-go řešení. Stačí přidat dinoflageláty.
  • průvodce kultivací řas.
• Sigma-Aldrich Spol. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ‚s (f/2) marine enrichment bazální sůl směs bez křemičitanu
    “ s makro-a mikroživin, jak je popsáno Guillardem (1975).“
    Sigma #G1775, cena $ 14.80 (USD) pro 10 l.
    Jedná se o kompletní ready-to-go řešení. Stačí přidat dinoflagellates!
• Národní centrum pro mořské řasy a Mikrobiotu
  • zvolte média L1 nebo f/2 pro dinoflageláty.
  • připravená média (1 galon, připravená k použití) nebo mediální soupravy (stačí přidat mořskou vodu)
  • pro do-it-your-selfer (pouze pro odvážné, kulturní recepty, které vyžadují citlivou rovnováhu a autokláv pro sterilizaci.

udržování kultur

vše, co potřebujete, jsou světla a časovač. Používáte-li sterilní média a sklo, vaše kultury budou pokračovat navždy; každý měsíc nalijte asi 1/4 kultury do nějakého nového média. Pokud nemůžete udržovat sterilní kultivační podmínky, buňky mohou trvat jen několik týdnů až měsíc, než bakterie přerůstají kulturu.

• pokojová teplota (20-25 degC)
• osvětlení chladně bílými zářivkami nebo LED žárovkami. Světla obchodů fungují dobře.
• světelný cyklus (12 hodin každý světlý, tmavý). Prokázat bioluminiscenci nejméně 2 hodiny do temného cyklu.
• kultivační baňky-sterilizované sklo pokud je k dispozici autokláv, jinak použijte jednorázové tkáňové kultivační baňky
• kultivační média (viz výše)

měření koncentrace buněk

množství pozorované nebo měřené bioluminiscence závisí na počtu přítomných buněk. Nejjednodušší způsob, jak určit koncentraci buněk, je spočítat dílčí vzorek buněk pomocí stereofonního mikroskopu. Zde je protokol pro počítání Pyrocystis fusiformis:

• několikrát jemně vířte baňkou, abyste důkladně promíchali obsah.
• odeberte vzorek 200 µL pomocí pipety P1000 nebo ekvivalentní pipety, která vám umožní změřit známý objem.
• umístěte vzorek do jamky.
• počet buněk pod stereo mikroskopem.
• nastavte hlasitost tak, aby v objemu bylo 10-20 buněk(tj.
• odeberte 5-6 vzorků a každý umístěte do jamky depresivního sklíčka.
• počet # buněk pod stereofonním mikroskopem. Vypočítejte průměrný počet buněk.
• Vypočítejte # buněk / mL (průměr # buněk / objem použitý * 1000 µL/mL)
• například 20 buněk / 200 µL * 1000 µL / mL = 100 buněk / mL