Latz Laboratory

en av de mest imponerande demonstrationerna av bioluminescens är också den enklaste. Dinoflagellater, de vanligaste källorna till bioluminescens vid havsytan, odlas lätt i laboratoriet. De producerar ljus bioluminescens vid agitation. Följande instruktioner beskriver hur man får dinoflagellatkulturer och odlar dem hemma, skolan eller laboratoriet. Kolla sedan in webbsidan på bioluminescence demonstrationer. Så lycka till!

boken algodling tekniker är en omfattande referens på odling av dinoflagellater och andra fytoplankton.

kulturer

här är några ställen att få självlysande dinoflagellater. Observera att denna lista inte är ett godkännande, bara ett förslag:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  kulturer av den ljusa dinoflagellate Pyrocystis fusiformis och näringsämnen.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  ”ljus från havet”. Kulturer av Pyrocystis fusiformis i olika storlekar.
• EMPCO
  kulturer av två arter av Pyrocystis.
• Carolina biologisk försörjning
  kulturer av Pyrocystis.
• UTEX (University of Texas) Kultursamling av alger
  en algkultursamling som används av forskare.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (stor sfärisk cell, ljus luminiscens)
  Pyrocystis lunula LB2166 (snabb tillväxt, ljus luminiscens)
  Pyrocystis lunula LB2504 (snabb tillväxt, ljus luminiscens)
• Nationellt centrum för marina alger och mikrobiota
  en stor kultursamling av självlysande dinoflagellater och andra fytoplankton, används av forskare.

näringsämnen

om du kan odla krukväxter kan du behålla dinoflagellater. Precis som dina krukväxter behöver gödselmedel för att hjälpa dem att växa, så har dinoflagellater också näringsbehov. Dinoflagellater kräver nitrat, fosfat, spårmetaller och vitaminer. Dessa näringsämnen bereds under sterila förhållanden, så om du inte har en autoklav tillgänglig är det lättare att köpa redan beredda medier än att göra dina egna.

• både Pyrofarms och EMPCO (se ovan) säljer färdiga näringsämnen för dinoflagellattillväxt.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Alga-Gro havsvatten medium ”för odling av marina alger”.
    Detta är en komplett färdig lösning. Lägg bara till dinoflagellater.
  • en guide till odling av alger.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ’s (f/2) marine anrikning basal salt blandning utan silikat
    ”med makro – och mikronäringsämnen som beskrivs av Guillard (1975).”
    Sigma # G1775, pris $14.80 (USD) för 10 L.
    Detta är en komplett färdig lösning. Lägg bara till dinoflagellater!
• Nationellt centrum för marina alger och mikrobiota
  • Välj L1 eller f/2 media för dinoflagellater.
  • beredda medier (1 gallon, redo att användas) eller mediasatser (lägg bara till havsvatten)
  • för gör-det-din-selfer (endast för de modiga, kulturrecept som kräver en känslig balans och autoklav för sterilisering.

underhålla kulturer

allt du behöver är lampor och en timer. Om du använder sterila medier och glasvaror kommer dina kulturer att fortsätta för alltid; varje månad häller cirka 1/4 av kulturen i något nytt medium. Om du inte kan upprätthålla sterila odlingsförhållanden kan cellerna pågå bara några veckor till en månad innan bakterier växer över kulturen.

• rumstemperatur (20-25 degC)
• belysning med kallvita lysrör eller LED-lampor. Shop lights fungerar bra.
• ljuscykel (12 timmar vardera ljus, mörk). Demonstrera bioluminescens minst 2 timmar in i den mörka cykeln.
• Kulturflaskor-steriliserat glas om autoklav finns, använd annars engångsvävnadskulturflaskor
• Kulturmedia (se ovan)

mätning av Cellkoncentration

mängden bioluminescens som observeras eller mäts beror på antalet närvarande celler. Det enklaste sättet att bestämma cellkoncentrationen är att räkna ett delprov av celler med hjälp av ett Stereomikroskop. Här är ett protokoll för att räkna Pyrocystis fusiformis:

• vrid försiktigt kolven några gånger för att noggrant blanda innehållet.
• ta bort 200 ml prov med en P1000 pipetman eller motsvarande pipett som låter dig mäta en känd volym.
• placera provet i brunnsliden.
• räkna antalet celler under Stereomikroskop.
• justera volymen så att det finns 10-20 celler i volymen (dvs de är lätta att räkna).
• ta 5-6 prover, placera var och en i en brunn i en depression.
• räkna # celler under Stereomikroskop. Beräkna genomsnittligt cellantal.
• beräkna # celler/mL (genomsnittliga # celler / volym som används * 1000 UCL / mL)
• till exempel 20 celler / 200 UCL * 1000 UCL / mL = 100 celler / mL