Latz Laboratory

uma das demonstrações mais impressionantes de bioluminescência também é a mais fácil. Os dinoflagelados, as fontes mais comuns de bioluminescência na superfície do mar, são prontamente cultivados em laboratório. Eles produzem bioluminescência brilhante após agitação. As instruções a seguir descrevem como obter culturas dinoflageladas e cultivá-las em casa, escola ou laboratório. Em seguida, confira a página da web sobre demonstrações de bioluminescência. Boa sorte!

O Livro Algal Culturing Techniques é uma referência abrangente sobre a cultura de dinoflagelados e outros fitoplâncton.

culturas

Aqui estão alguns lugares para obter dinoflagelados luminescentes. Observe que esta lista não é um endosso, apenas uma sugestão:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Culturas do dinoflagelado brilhante pyrocystis fusiformis e nutrientes.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  “Luzes Do Mar”. Culturas de Pyrocystis fusiformis em diferentes tamanhos.
• EMPCO
  culturas de duas espécies de Pirocystis.
• Carolina Biological Supply
  Cultures of Pyrocystis.
• a coleção de Cultura UTEX (Universidade do Texas) de algas
  uma coleção de cultura de algas usada por cientistas.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (grande célula esférica, brilhante luminescência)
  Pyrocystis lunula LB2166 (crescimento rápido, brilhante luminescência)
  Pyrocystis lunula LB2504 (crescimento rápido, brilhante luminescência)
• Centro Nacional de Algas Marinhas e Microbiota
  Uma grande coleção de culturas de luminescentes dinoflagelados e outros fitoplâncton, usado pelos cientistas.

nutrientes

se você pode cultivar plantas de casa, então você pode manter dinoflagelados. Assim como suas plantas de casa precisam de fertilizantes para ajudá-las a crescer, os dinoflagelados também têm necessidades nutricionais. Os dinoflagelados requerem nitrato, fosfato, oligoelementos e vitaminas. Esses nutrientes são preparados em condições estéreis, portanto, se você não tiver uma autoclave disponível, é mais fácil comprar meios já preparados do que fazer os seus próprios.

• tanto Pyrofarms quanto EMPCO (veja acima) vendem nutrientes prontos para uso para o crescimento dinoflagelado.
• Carolina Biological Supply Co.
  • meio de água do mar Alga-Gro “para cultivo de algas marinhas”.
    esta é uma solução completa pronta para uso. Basta adicionar dinoflagelados.
  • um guia para cultivar algas.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • mistura de sal basal de enriquecimento marinho Guillard (F/2) sem silicato
    “com os macro e micronutrientes descritos por Guillard (1975).”
    Sigma # G1775, preço $14.80 (USD) para 10 L.
    esta é uma solução completa pronta para uso. Basta adicionar dinoflagelados!
• Centro Nacional de algas marinhas e Microbiota
  • escolha meios L1 ou f/2 para dinoflagelados.
  • Preparado media (1 galão, pronto para uso) ou kits de mídia (basta adicionar água do mar)
  • Para o do-it-your-selfer (para os bravos só, cultura receitas que exigem um equilíbrio sensível e autoclave para a esterilização.

mantendo culturas

tudo que você precisa São Luzes e um temporizador. Se você usar meios estéreis e produtos de vidro, suas culturas continuarão para sempre; todos os meses despeje cerca de 1/4 da cultura em algum novo meio. Se você não conseguir manter condições de cultura estéreis, as células podem durar apenas algumas semanas a um mês antes que as bactérias cresçam demais na cultura.

• temperatura ambiente (20-25 degC)
• Iluminação com lâmpadas fluorescentes ou LED de cor branca fria. As luzes da loja funcionam bem.
• ciclo de luz (12 horas Cada luz, escuro). Demonstrar bioluminescência pelo menos 2 horas no ciclo escuro.
• frascos de Cultura — vidraria esterilizada se a autoclave estiver disponível, caso contrário, use frascos de cultura de tecido descartáveis
• meios de Cultura (veja acima)

medir a concentração celular

a quantidade de bioluminescência observada ou medida depende do número de células presentes. A maneira mais simples de determinar a concentração celular é contar uma subamostra de células usando um microscópio estéreo. Aqui está um protocolo para contar Pyrocystis fusiformis:

• agite suavemente o frasco algumas vezes para misturar completamente o conteúdo.
• remova a amostra de 200 µL usando um pipetman P1000 ou pipeta equivalente que permite medir um volume conhecido.
• coloque a amostra no slide do poço.
• conte o número de células sob microscópio estéreo.
• Ajuste o volume para que haja 10-20 células no volume (ou seja, são fáceis de contar).
• pegue 5-6 amostras, colocando cada uma em um poço de uma lâmina de depressão.
• Contagem # células sob microscópio estéreo. Calcule a contagem média de células.
• Calcular # células/mL (média # células / volume * 1000 µL/mL)
• Por exemplo, 20 células / 200 µL * 1000 µL/mL = 100 células/mL