Latz Laboratory

een van de meest indrukwekkende demonstraties van bioluminescentie is ook de makkelijkste. Dinoflagellaten, de meest voorkomende bronnen van bioluminescentie aan het zeeoppervlak, worden gemakkelijk gekweekt in het laboratorium. Ze produceren heldere bioluminescentie bij agitatie. De volgende instructies beschrijven hoe je dinoflagellaatculturen kunt verkrijgen en deze thuis, op school of in het laboratorium kunt kweken. Bekijk dan de webpagina over bioluminescentiedemonstraties. Dus veel geluk!

het boek Algenkweektechnieken is een uitgebreide referentie over de kweek van dinoflagellaten en ander fytoplankton.

culturen

hier zijn enkele plaatsen om luminescente dinoflagellaten te verkrijgen. Merk op dat deze lijst geen goedkeuring is, maar een suggestie:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  culturen van het heldere dinoflagellaatpyrocystis fusiformis en nutriënten.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  “Lights from the Sea”. Culturen van Pyrocystis fusiformis in verschillende maten.
• EMPCO
  culturen van twee soorten Pyrocystis.
• Carolina Biological Supply
  Cultures of Pyrocystis.
• de UTEX (University Of Texas) Kweekverzameling van algen
  een algenkweekverzameling gebruikt door wetenschappers.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (grote bolvormige cel, lichte luminescentie)
  Pyrocystis lunula LB2166 (snelle groei, lichte luminescentie)
  Pyrocystis lunula LB2504 (snelle groei, lichte luminescentie)
• Nationaal Centrum voor Mariene Algen en Microbiota
  Een groot cultuur collectie van verlichte dinoflagellaten en overige fytoplankton, gebruikt door wetenschappers.

nutriënten

als u kamerplanten kunt kweken, kunt u dinoflagellaten behouden. Net zoals uw kamerplanten voedingsstoffen nodig hebben om te groeien, hebben ook dinoflagellaten voedingsbehoeften. Dinoflagellaten vereisen nitraat, fosfaat, sporenmetalen en vitaminen. Deze voedingsstoffen worden onder steriele omstandigheden bereid, dus als u geen autoclaaf beschikbaar heeft, is het gemakkelijker om reeds bereide media te kopen dan om uw eigen te maken.

• zowel Pyrofarms als EMPCO (zie hierboven) verkopen gebruiksklare nutriënten voor de groei van dinoflagellaten.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Alga-Gro zeewatermedium “for culturing marine algen”.
    dit is een complete kant-en-klare oplossing. Voeg gewoon dinoflagellaten toe.
  • a guide to culturing algen.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ‘ s (f / 2) mariene verrijking basaal zoutmengsel zonder silicaat
    “met de macro – en micronutriënten zoals beschreven door Guillard (1975).”
    Sigma #G1775, prijs $14,80 (USD) voor 10 L.
    Dit is een complete kant-en-klare oplossing. Voeg gewoon dinoflagellaten toe!
• Nationaal Centrum voor mariene algen en Microbiota
  • kies L1 of f/2 media voor dinoflagellaten.
  • bereide media (1 gallon, gebruiksklaar) of mediakits (voeg gewoon zeewater toe)
  • voor de doe-het-je-selfer (alleen voor de brave, cultuurrecepten die een gevoelige balans en een autoclaaf voor sterilisatie vereisen.

behoud van culturen

alles wat je nodig hebt zijn Verlichting en een timer. Als u steriele media en glaswerk gebruikt, zullen uw culturen voor altijd doorgaan; elke maand giet ongeveer 1/4 van de cultuur in een nieuw medium. Als je geen steriele kweekvoorwaarden kunt handhaven, kunnen de cellen slechts een paar weken tot een maand duren voordat bacteriën de kweek overgroeien.

• kamertemperatuur (20-25 degC)
• Verlichting met koelwitte fluorescerende of LED-lampen. Winkelverlichting werkt goed.
• lichtcyclus (12 uur per licht, donker). Demonstreer bioluminescentie ten minste 2 uur in de donkere cyclus.
• Cultuurkolven-gesteriliseerd glaswerk indien een autoclaaf beschikbaar is, gebruik anders wegwerpbare weefselcultuurkolven
• cultuurmedia (zie hierboven))

Meetcelconcentratie

de hoeveelheid bioluminescentie die wordt waargenomen of gemeten, hangt af van het aantal aanwezige cellen. De eenvoudigste manier om celconcentratie te bepalen is om een subsample van cellen te tellen met behulp van een stereomicroscoop. Hier is een protocol om Pyrocystis fusiformis te tellen:

• draai de kolf een paar keer voorzichtig om de inhoud goed te mengen.
• verwijder 200 µL monster met een P1000 pipetman of gelijkwaardige pipet waarmee u een bekend volume kunt meten.
• plaats het monster in een put.
• Tel het aantal cellen onder stereomicroscoop.
• pas het volume aan zodat er 10-20 cellen in het volume zitten (d.w.z. ze zijn gemakkelijk te tellen).
• neem 5-6 monsters en plaats ze in een put van een slide.
• Tel # cellen onder stereomicroscoop. Bereken het gemiddelde aantal cellen.
• Bereken # cellen/mL (gemiddelde # cellen / volume gebruikt * 1000 µL / mL)
• bijvoorbeeld 20 cellen / 200 µL * 1000 µL / mL = 100 cellen / mL