Latz Laboratory

En av de mest imponerende demonstrasjonene av bioluminescens er også den enkleste. Dinoflagellater, de vanligste kildene til bioluminescens på sjøoverflaten, dyrkes lett i laboratoriet. De produserer lyse bioluminescens ved agitasjon. Følgende instruksjoner beskriver hvordan du får dinoflagellatkulturer og dyrker dem hjemme, på skolen eller i laboratoriet. Så sjekk Ut Nettsiden på bioluminescence demonstrasjoner. Så lykke til!

Boken Algal Culturing Techniques er en omfattende referanse på dyrking av dinoflagellater og annet fytoplankton.

Kulturer

Her er noen steder å skaffe luminescerende dinoflagellater. Merk at denne listen ikke er en anbefaling, bare et forslag:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  Kulturer av den lyse Dinoflagellate Pyrocystis fusiformis og næringsstoffer.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  «Lys fra Havet». Kulturer Av Pyrocystis fusiformer i forskjellige størrelser.
• EMPCO
  Kulturer av To arter Av Pyrocystis.
• Carolina Biologisk Forsyning
  Kulturer Av Pyrocystis.
• UTEX (University Of Texas) Kultur Samling Av Alger
  en algekultur samling brukt av forskere.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (stor sfærisk celle, lyse luminescens)
  Pyrocystis lunula LB2166 (rask vekst, lyse luminescens)
  Pyrocystis lunula LB2504 (rask vekst, lyse luminescens)
• Nasjonalt Senter For Marine Alger Og Mikrobiota
  en stor kultur samling av selvlysende dinoflagellater og andre fytoplankton, brukes av forskere.

Næringsstoffer

hvis du kan dyrke kremplanter, kan du opprettholde dinoflagellater. Akkurat som potteplanter trenger gjødsel for å hjelpe dem å vokse, så også dinoflagellates har ernæringsmessige behov. Dinoflagellater krever nitrat, fosfat, spormetaller og vitaminer. Disse næringsstoffene er tilberedt under sterile forhold, så hvis du ikke har en autoklav tilgjengelig, er det lettere å kjøpe allerede forberedte medier enn å lage din egen.

• Både Pyrofarms og EMPCO (se ovenfor) selger klare næringsstoffer for dinoflagellatvekst.
• Carolina Biologiske Forsyning Co.
  • Alga-Gro sjøvannsmedium «for dyrking av marine alger».
    Dette er en komplett ready-to-go løsning. Bare legg til dinoflagellates.
  • en guide til dyrking av alger.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ‘ s (f/2)marine berikelse basal saltblanding uten silikat
    «med makro – og mikronæringsstoffer som beskrevet Av Guillard (1975).»
    Sigma # G1775, pris $14.80 (USD) for 10 L.
    Dette er en komplett ready-to-go løsning. Bare legg til dinoflagellates!
• Nasjonalt Senter For Marine Alger Og Mikrobiota
  • Velg l1 eller f/2 media for dinoflagellater.
  • Forberedt media (1 gallon, klar til bruk) eller media kits (bare legge sjøvann)
  • for gjør-det-din-selfer (for den modige bare, kultur oppskrifter som krever en sensitiv balanse og autoklav for sterilisering.

Opprettholde Kulturer

Alt du trenger er lys og en timer. Hvis du bruker sterile medier og glassvarer, vil kulturer fortsette for alltid; hver måned helles ca 1/4 av kulturen inn i noe nytt medium. Hvis du ikke kan opprettholde sterile kulturforhold, kan cellene vare bare noen få uker til en måned før bakterier overgrover kulturen.

• Romtemperatur (20-25 degC)
• Belysning med kaldhvite lysrør eller LED-pærer. Butikklys fungerer bra.
• Lys syklus (12 timer hver lys, mørk). Demonstrere bioluminescens minst 2 timer inn i den mørke syklusen.
• Kulturkolber-Sterilisert glass hvis autoklav er tilgjengelig, ellers bruk engangs vevskulturkolber
• kulturmedier(se ovenfor)

Måling Av Cellekonsentrasjon

mengden bioluminescens som observeres eller måles, avhenger av antall celler tilstede. Den enkleste måten å bestemme cellekonsentrasjon på er å telle en underprøve av celler ved hjelp av et stereomikroskop. Her er en protokoll for å telle Pyrocystis fusiformis:

• forsiktig vri kolben et par ganger for å blande innholdet grundig.
• Fjern 200 µ prøve ved hjelp Av En p1000 pipetman eller tilsvarende pipette som lar deg måle et kjent volum.
• Plasser prøven i godt lysbilde.
• Telle antall celler under stereo mikroskop.
• Juster volumet slik at det er 10-20 celler i volumet (dvs.de er enkle å telle).
• Ta 5-6 prøver, plassere hver i en brønn av en depresjon lysbilde.
• Telle # celler under stereo mikroskop. Beregn gjennomsnittlig celletall.
• Beregn # celler / mL (gjennomsnittlig # celler / volum brukt * 1000 µ / mL)
• for eksempel 20 celler / 200 µ * 1000 µ / mL = 100 celler/mL