Latz laboratórium

a biolumineszcencia egyik leglátványosabb demonstrációja szintén a legegyszerűbb. Dinoflagellátok, a tenger felszínén a biolumineszcencia leggyakoribb forrásai, könnyen termeszthetők a laboratóriumban. Agitáció után fényes biolumineszcenciát termelnek. A következő utasítások leírják, hogyan lehet dinoflagellát tenyészetet szerezni és otthon, iskolában vagy laboratóriumban termeszteni. Ezután nézze meg a biolumineszcencia demonstrációk weboldalát. Szóval sok szerencsét!

az Algal Culturing Techniques című könyv átfogó referenciaként szolgál a dinoflagellátok és más fitoplanktonok tenyésztéséről.

kultúrák

íme néhány hely a lumineszcens dinoflagellátok előállításához. Vegye figyelembe, hogy ez a lista nem jóváhagyás, csak javaslat:

• Pirofarmok (760-335-0990)
  a fényes dinoflagellát Pyrocystis fusiformis tenyészetei és tápanyagai.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  “fények a tengerből”. Különböző méretű pyrocystis fusiformis kultúrák.
• EMPCO
  két Pyrocystis faj tenyészetei.
• Carolina biológiai ellátás
  Pyrocystis tenyészetek.
• az UTEX (Texasi Egyetem) Algakultúra-gyűjteménye
  a tudósok által használt algakultúra-gyűjtemény.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (nagy gömb alakú sejt, fényes lumineszcencia)
  Pyrocystis lunula LB2166 (gyors növekedés, fényes lumineszcencia)
  Pyrocystis lunula LB2504 (gyors növekedés, fényes lumineszcencia)
• nemzeti tengeri algák és mikrobioták központja
  lumineszcens dinoflagellátok és más fitoplankton nagy tenyészetgyűjteménye, a tudósok használják.

tápanyagok

ha szobanövényeket termeszthet, akkor fenntarthatja a dinoflagellátokat. Ahogy a szobanövényeknek műtrágyára van szükségük a növekedéshez, úgy a dinoflagellátoknak is táplálkozási igényeik vannak. A dinoflagellátok nitrátot, foszfátot, nyomfémeket és vitaminokat igényelnek. Ezeket a tápanyagokat steril körülmények között állítják elő, így ha nincs elérhető autokláv, könnyebb megvásárolni a már elkészített adathordozót, mint elkészíteni a sajátját.

• mind a Pirofarmok, mind az EMPCO (lásd fent) felhasználásra kész tápanyagokat árulnak a dinoflagellát növekedéséhez.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Alga-Gro tengervíz táptalaj “tengeri algák tenyésztésére”.
    ez egy komplett kész megoldás. Csak adjon hozzá dinoflagellátokat.
  • útmutató az algák tenyésztéséhez.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard (f/2) tengeri dúsító bazális só keveréke szilikát nélkül
    “a Guillard (1975) által leírt makro – és mikrotápanyagokkal.”
    Sigma # G1775, ár 14,80 USD (USD) 10 l-re.
    ez egy komplett kész megoldás. Csak add dinoflagellates!
• nemzeti tengeri algák és mikrobioták központja
  • válasszon L1 vagy f/2 táptalajt a dinoflagellátokhoz.
  • előkészített Média (1 gallon, használatra kész) vagy média készletek (csak add tengervíz)
  • a do-it-your-selfer (a bátor csak, kultúra receptek, amelyek megkövetelik a érzékeny egyensúlyt és autokláv sterilizálás.

tenyészetek fenntartása

csak lámpákra és időzítőre van szüksége. Ha steril táptalajt és üvegárut használsz, a kultúrád örökké fennmarad; minden hónapban a kultúra körülbelül 1/4-ét öntsd valamilyen új közegbe. Ha nem tudja fenntartani a steril tenyésztési feltételeket, a sejtek csak néhány héttől egy hónapig tarthatnak, mielőtt a baktériumok túlnövekednének a tenyészetben.

• szobahőmérséklet (20-25 degC)
• megvilágítás hidegfehér fluoreszkáló vagy LED izzókkal. A bolt fényei jól működnek.
• Fényciklus (12 óra minden világos, sötét). Mutassa be a biolumineszcenciát legalább 2 órával a sötét ciklusba.
• Tenyészlombikok-sterilizált üvegáru, ha autokláv áll rendelkezésre, egyébként használjon eldobható szövettenyésztő lombikokat
• táptalaj (lásd fent)

a Sejtkoncentráció mérése

a megfigyelt vagy mért biolumineszcencia mennyisége a jelenlévő sejtek számától függ. A sejtkoncentráció meghatározásának legegyszerűbb módja a sejtek egy részmintájának megszámlálása sztereomikroszkóppal. Itt van egy protokoll a Pyrocystis fusiformis számlálására:

• óvatosan forgassa a lombikot néhányszor, hogy alaposan összekeverje a tartalmat.
• távolítsa el a 200 6L mintát egy P1000 pipetman vagy azzal egyenértékű pipetta segítségével, amely lehetővé teszi az ismert térfogat mérését.
• helyezze a mintát a kútba.
• gróf sejtek száma sztereomikroszkóp alatt.
• állítsa be a hangerőt úgy, hogy 10-20 cella legyen a hangerőben (azaz könnyen megszámolhatók).
• Vegyünk 5-6 mintát, mindegyiket egy mélyedéslemez kútjába helyezve.
• Gróf # sejtek sztereomikroszkóp alatt. Számítsa ki az átlagos sejtszámot.
• számítsuk ki # sejtek/mL (átlagos # sejtek / térfogat használt * 1000 ons/mL)
• például 20 db / 200 db / ml * 1000 db / ml = 100 db/mL