Latz-laboratorio

yksi vaikuttavimmista bioluminesenssin demonstraatioista on myös helpoin. Dinoflagellaatteja, jotka ovat yleisimpiä bioluminesenssin lähteitä meren pinnalla, kasvatetaan helposti laboratoriossa. Ne tuottavat kirkasta bioluminesenssia kiihtyessään. Seuraavat ohjeet kuvaavat, miten saada dinoflagellaattiviljelmiä ja kasvattaa niitä kotona, koulussa tai laboratoriossa. Sitten tutustu Web-sivun bioluminescence demonstraatioita. Joten onnea!

kirja levien Viljelytekniikat on kattava viittaus dinoflagellaattien ja muiden kasviplanktonien viljelyyn.

viljelmät

tässä on joitakin paikkoja saada luminescent dinoflagellaatteja. Huomaa, että tämä luettelo ei ole merkintä, vain ehdotus:

• Pyrofarms (760-335-0990)
  kirkkaan dinoflagellaatin Pyrocystis fusiformis-viljelmät ja ravinteet.
• Sunnyside Sea Farms (805-964-5844)
  ”Lights from the Sea”. Pyrocystis fusiformis-viljelmiä eri kokoisia.
• EMPCO
  kahden Pyrokystislajin viljelmät.
• Carolinan biologinen tarjonta
  Pyrocystis-viljelmät.
• UTEX (University of Texas) levien Viljelykokoelma
  tutkijoiden käyttämä leväviljelykokoelma.
  Pyrocystis noctiluca LB2504 (suuri pallomainen solu, kirkas luminesenssi)
  Pyrocystis lunula LB2166 (nopea kasvu, kirkas luminesenssi)
  Pyrocystis lunula lb2504 (nopea kasvu, kirkas luminesenssi)
• merilevien ja mikrobien kansallinen keskus
  suuri luminesoivien dinoflagellaattien ja muiden kasviplanktonien viljelmäkokoelma, jota tiedemiehet käyttävät.

ravinteet

jos huonekasveja voi kasvattaa, voi ylläpitää dinoflagellaatteja. Aivan kuten huonekasvisi tarvitsevat lannoitteita kasvaakseen, myös dinoflagellaateilla on ravinnontarve. Dinoflagellaatit vaativat nitraattia, fosfaattia, pieniä metalleja ja vitamiineja. Nämä ravintoaineet valmistetaan steriileissä olosuhteissa, joten jos sinulla ei ole autoklaavia saatavilla, on helpompi ostaa valmiiksi valmistettuja väliaineita kuin tehdä omia.

• sekä Pyrofarms että EMPCO (KS.edellä) myyvät käyttövalmiita ravinteita dinoflagellaatin kasvuun.
• Carolina Biological Supply Co.
  • Alga-Gro seawater medium ”for culturing marine levät”.
    tämä on täysin valmis ratkaisu. Lisää vain dinoflagellaatteja.
  • a guide to culturing levät.
• Sigma-Aldrich Co. , www.sigmaaldrich.com
  • Guillard ’s (f/2) marine enrichment basal salt seos ilman silikaattia
    ”With the macro – and microrutrients as described by Guillard (1975).”
    Sigma #G1775, hinta 14,80 dollaria (USD) 10 litralle.
    tämä on täysin valmis ratkaisu. Lisää vain dinoflagellaatteja!
• Kansallinen merilevien ja mikrobien keskus
  • valitse Dinoflagellaateille L1 tai f / 2 väliainetta.
  • valmiit mediat (1 gallona, käyttövalmis) tai mediapakkaukset (vain lisää merivettä)
  • tee-se-itse-selferille (vain rohkeille, kulttuuriresepteille, jotka vaativat herkän tasapainon ja autoklaavin sterilointia varten.

viljelmien ylläpitäminen

tarvitaan vain valot ja ajastin. Jos käytät steriilejä väliaineita ja lasiesineitä, kulttuurisi jatkuvat ikuisesti; joka kuukausi noin 1/4 viljelmästä kaadetaan johonkin uuteen väliaineeseen. Jos et pysty ylläpitämään steriilejä viljelyolosuhteita, solut voivat kestää vain muutamasta viikosta kuukauteen ennen kuin bakteerit kasvattavat viljelmää.

• huoneenlämpö (20-25 degC)
• Valaistus viileänvalkoisilla loiste-tai LED-lampuilla. Kauppojen valot toimivat hyvin.
• Valosykli (12 h kukin vaalea, tumma). Osoitettava bioluminesenssi vähintään 2 tuntia pimeän syklin aikana.
• viljelypullot-steriloidut lasiesineet, jos saatavilla on Autoklaavi, muussa tapauksessa käytetään kertakäyttöisiä kudosviljelypulloja
• viljelyaine (KS. edellä))

Solukonsentraation mittaaminen

havaitun tai mitatun bioluminesenssin määrä riippuu läsnä olevien solujen määrästä. Yksinkertaisin tapa määrittää solukonsentraatio on laskea solujen osanäyte stereomikroskoopilla. Tässä on protokolla Pyrocystis fusiformisin laskemiseksi.:

• pyörittele pulloa varovasti muutaman kerran, jotta sisältö sekoittuu perusteellisesti.
• poistetaan 200 µL: n näyte käyttämällä P1000 pipetmania tai vastaavaa pipettiä, jolla voidaan mitata tunnettu tilavuus.
• aseta näyte kaivoviistoon.
• laske solujen määrä stereomikroskoopilla.
• Säädä tilavuus niin, että tilavuudessa on 10-20 solua (eli ne on helppo laskea).
• otetaan 5-6 näytettä, joista jokainen laitetaan painumavyöryn kaivoon.
• laske # soluja stereomikroskoopilla. Laske keskimääräinen solumäärä.
• lasketaan # soluja / mL (keskimääräinen # soluja / käytetty tilavuus * 1000 µL/mL)
• esimerkiksi 20 solua / 200 µL * 1000 µL / mL = 100 solua/mL